Sammanfattning
Lite information finns om föreningen av anti-SSA/Ro60 och anti-Ro52/TRIM21 med systemisk lupus erytematosus (SLE) funktioner. I detta arbete analyserade vi sambandet mellan både anti-Ro-reaktiviteter och kliniska och immunologiska manifestationer hos 141 SLE-patienter. Fotosensitivitet och xeroftalmi / xerostomia befanns vara positivt associerade med både anti-ssa / Ro60 ( och resp.) och anti-Ro52/TRIM21 ( och , resp.)., Däremot upptäcktes en negativ förening avseende antifosfolipidantikroppar, anti-ssa / Ro60 med en starkare effekt () än anti-Ro52/TRIM21. Anti-ssa / Ro60 visade en specifik positiv association med hypokomplementemi (), huvudsakligen med låga C4-nivåer (), medan anti-Ro52/TRIM21 befanns vara positivt associerad med Raynauds fenomen () och cytopeni () och negativt associerad med anti-dsDNA (). Lymfocyter är involverade i förhållandet mellan Anti-Ro52/TRIM21 och cytopeni eftersom positiva patienter visade lägre cellnivåer än negativa patienter ()., Sammanfattningsvis, anti-SSA/Ro60 och anti-Ro52/TRIM21 visade både gemensamma och specifika föreningar i SLE. Dessa uppgifter ökar således bevis på de olika sammanslutningarna av de två Anti-Ro-särdragen även i en viss sjukdom.
1. Inledning
Anti-ssa/Ro60 och anti-Ro52/TRIM21 är bland de vanligaste detekterade autoantikropparna i rutinscreening för systemiska autoimmuna sjukdomar., Även om båda antikroppsreaktiviteterna ansågs vara en del av anti-Ro-systemet under lång tid, är det nu tydligt att deras antigener är olika, inte ingår i ett stabilt makromolekylärt komplex och ligger i olika cellulära fack (granskat i ). Dessutom har anti-ssa/Ro60 och anti-Ro52/TRIM21 antikroppar också associerats med ett annat mönster av kliniska manifestationer., Således förekomsten av anti-SSA/Ro60 är relaterade till autoimmuna processer, främst systemisk lupus erythematosus (SLE) och Sjögrens syndrom (SS), medan anti-Ro52/TRIM21 visar ett bredare spektrum av sjukdomar föreningar . De viktigaste kliniska autoimmuna enheterna associerade med anti-Ro52 / TRIM21 är SS, systemisk skleros (SSc), lever autoimmuna sjukdomar och speciellt myosit där det har ansetts vara en oberoende markör . Anti-Ro52 / TRIM21 har också detekterats vid nonautoimmuna tillstånd som infektioner och neoplastiska sjukdomar ., Dessutom, olika föreningar med specifika kliniska manifestationer har också rapporterats särskilt för anti-Ro52/TRIM21. Faktum är att denna anti-Ro-reaktivitet är starkt förknippad med medfödd hjärtblock i neonatal lupus och med interstitiell lungsjukdom . Anti-Ro52 / TRIM21 har också relaterats till en allvarligare sjukdom hos SS, myosit, primär biliär cirros och autoimmun hepatit .
bland systemiska autoimmuna sjukdomar visar SLE ett specifikt Anti-ro-antikroppsmönster., Även om samtidig reaktivitet är det frekventare antikroppsmönstret, visar denna sjukdom Den högsta prevalensen av isolerad anti-ssa / Ro60 . I SLE har antikroppar mot Ro-systemet historiskt förknippats med ljuskänslighet, men det finns lite information om sambandet mellan båda Anti-Ro-reaktiviteterna och andra kliniska manifestationer ., Därför, med denna bakgrund i åtanke, syftet med detta arbete var att analysera om anti-ssa/Ro60 och anti-Ro52 / TRIM21 antikroppar är differentiellt förknippade med de kliniska klassificeringskriterierna och andra frekventa manifestationer av SLE.
2. Patienter och metoder
2, 1. Patienter, Sera Urval, och Analyserade Funktioner
Sera från 141 SLE-patienter (131 kvinnor, medelålder vid diagnos för 36,7 ± 14.5 år) som uppfyllde American College of Rheumatology (ACR) kriterier valdes för denna studie ., Dessa patienter följdes upp vid den interna medicin autoimmuna Sjukdomsenheten, Hospital Universitario Central de Asturias, och deras kliniska och immunologiska egenskaper registrerades i en databas med SLE-patienter etablerade i vår region från 2004 som regelbundet uppdateras . Funktioner som registrerats i denna databas inkluderade ACR-klassificeringskriterierna och andra relaterade SLE-manifestationer eller immunologiska parametrar. I detta arbete registrerades alla funktioner utom cytopeni kumulativt., Cytopeni övervägdes vid diagnos för att undvika påverkan av behandlingen på de hematologiska parametrarna. Endast de egenskaper vars prevalens var högre än 10% analyserades statistiskt. I synnerhet de funktioner som ingår i analysen var ACR klassificeringskriterierna, icke-skarv alopeci, xeroftalmi/xerostomi, Raynauds fenomen och hypokomplementemi. Alla klassificeringskriterier definierades enligt 1996 års ACR-kriterier, med undantag för neurologiska störningar., I denna SLE-manifestation betraktades organiskt hjärnsyndrom, synstörningar och perifer och kranial nervsjukdom också bredvid anfall och psykos. Hypocomplementemia definierades som att ha låga C3-och/eller C4-nivåer (<0.8 mg/dL och <0.15 mg/dL, resp.).
serum som motsvarar olika patienters revideringar samlades in och lagrades vid -20 ° C. Det sista serumet från varje patient valdes ut för studien (insamlingsperiod från februari 2007 till mars 2011). Medelåldern vid tidpunkten för analysen var år.
2.2., Bestämning av Autoantikroppar, Komplettera, och Hematologiska Parametrar
Bestämning av anti-SSA/Ro60 och anti-Ro52/TRIM21 antikroppar i 141 valda SLE-patienter utfördes av fluor enzyme immunoassay (Thermo Fisher Scientific-Phadia GmbH, Freiburg, Tyskland). Analysen utfördes på en automatiserad ImmunoCAP 250-analysator. Hos alla patienter bestämdes även andra SLE ANA-specifika egenskaper (anti-dsDNA, SS-B/La, U1RNP och Sm) och anticardiolipin (CL) IgG-och IgM-antikroppar med samma metod., C3-och C4-nivåerna mättes av nefelometri (Beckman Coulter Inc., Kalifornien, USA).
Nivåer av haematologic parametrar, kvantifieras med hjälp av en Advia 2120 analyzer (Siemens Healthcare, Erlangen, Tyskland), var tillgängliga vid tidpunkten för autoantikroppar beslutsamhet i 128 patienter (119 kvinnor; medelålder vid diagnos och vid analys och år, resp.). Leukopeni, lymfopeni och trombocytopeni ansågs enligt ACR-kriterierna (<4,00 × 103/µL, <1,50 × 103/µL och <100.00 × 103/µL, resp.,) och anemi definierades genom en hemoglobinkoncentration på <11, 0 mg/dL hos kvinnor och <12, 0 mg/dL hos män.
2.3. Statistisk analys
föreningen av närvaron av anti-ssa/Ro60 och anti-Ro52 / TRIM21 med SLE-manifestationer analyserades genom binär logistisk regression justerad för kön och ålder vid diagnos och vid analystillfället., Tidigare analyserades närvaron av både anti-Ro-särdrag och av anti-dsDNA, SSB/La, RNP, Sm och Cl-antikroppar samtidigt genom stegvis logistisk regressionsförfarande för att visa dess inflytande på varje klinisk manifestation och immunologisk parameter. Vid behov inkluderades andra autoantikroppar som visade sig vara statistiskt inflytelserika i den binära logistiska regressionsanalysen av anti-ssa/Ro60 och anti-Ro52/TRIM21-föreningar. I denna analys ingick båda Anti-Ro-reaktiviteterna först tillsammans som oberoende variabler., För att undvika multicollinearity effekter orsakade av det nära sambandet mellan båda särdragen, utfördes en separat antikroppsanalys när en icke statistiskt signifikant förening hittades. Oddsförhållandena (eller) och deras 95% konfidensintervall (CI) beräknades. Nivåer av komplementära och hematologiska parametrar jämfördes med studentens eller Mann-Whitney-testerna enligt datadistribution. Resultaten ansågs statistiskt signifikanta när värdet var<0,05. Statistisk analys utfördes med användning av SPSS 15.,0 programvara för statistik (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
3. Resultat
3.1. Förekomsten av Anti-SSA/Ro60 och Anti-Ro52/TRIM21 i SLE-Patienter
förekomsten av anti-SSA/Ro60 och/eller anti-Ro52/TRIM21 antikroppar upptäcktes i 62 av 141 SLE-patienter analyseras (44.0%). Samtidig reaktivitet var det huvudsakliga observerade antikroppsmönstret, 37 patienter var positiva för båda antikropparna (26, 2%). Enbart Anti-ssa/Ro60 var närvarande hos 23 (16, 3%), medan isolerad Anti-Ro52/TRIM21-reaktivitet endast sågs hos två patienter (1, 4%)., Antikroppsmönstret i denna patientserie överensstämde således med det fastställda förhållandet mellan anti-ssa/Ro60 och SLE och det var inte associerat med ålder vid diagnos eller könsprevalens (Tabell 1).
3.2. Sammanslutningar av Anti-SSA/Ro60 och Anti-Ro52/TRIM21 med Kliniska Manifestationer vid SLE
När anti-SSA/Ro60 och anti-Ro52/TRIM21 var samtidigt ingår som oberoende variabler i regressionsanalysen, den enda betydande föreningen fann var cytopeni med anti-Ro52/TRIM21 (Tabell 2)., På grund av detta resultat analyserade vi dessutom förhållandet mellan dessa autoantikroppar och de olika typerna av hematologiska ACR-kriterier, och en trend mot ett samband mellan anti-Ro52/TRIM21 och leukopeni/lymfopeni observerades (Tabell 2). Trombocytopeni kunde inte analyseras eftersom alla trombocytopeniska patienter med anti-ro-antikroppar var positiva för båda särdragen (4 av 4), inte heller hemolytisk anemi analyserades på grund av det låga antalet patienter (endast fem) med denna blodsjukdom.,
på samma sätt som cytopeni, munsår och Raynauds fenomen befanns också vara positivt, men inte signifikant, associerat med anti-Ro52 / TRIM21 (Tabell 2). När anti-Ro52 / TRIM21 analyserades separat utan att inkludera anti-ssa / Ro60 som annan oberoende variabel blev endast föreningen med Raynauds fenomen statistiskt signifikant (eller 2.46, ci 95% 1.11-5.43).
ingen av de återstående kliniska manifestationerna visade ett signifikant samband med anti-ssa/Ro60 och/eller anti-Ro52/TRIM21 om båda antikropparna analyserades samtidigt eller separat.,
3.3. Sammanslutningar av Anti-SSA/Ro60 och Anti-Ro52/TRIM21 med Immunologiska Parametrar i SLE
Anti-SSA/Ro60 och anti-Ro52/TRIM21 visade också en annan association med SLE – relaterad immunologiska parametrar. Faktum är att när de två anti-Ro-reaktiviteterna betraktades tillsammans som oberoende variabler observerades ett motsatt beteende avseende förekomsten av anti-dsDNA-antikroppar och hypokomplementemi, anti-ssa/Ro60 var positivt associerat och anti-Ro52/TRIM21 negativt associerat (tabell 3)., De enda föreningar som visade sig vara statistiskt signifikanta var emellertid det negativa sambandet mellan Anti-Ro52/TRIM21 och anti-dsDNA-antikroppar och den positiva mellan anti-ssa/Ro60 och hypokomplementemi. Både låga C3-och C4-nivåer befanns vara positivt associerade med anti-ssa / Ro60 men endast föreningen med C4 var statistiskt signifikant. Dessutom var nivåerna av denna komplementfraktion, men inte nivåerna av C3, också signifikant lägre hos anti-ssa / Ro60-positiva patienter än hos negativa patienter vid tidpunkten för autoantikroppsbestämning (0,16 ± 0.,06 mg/dL jämfört med mg/dL och mg/dL jämfört med mg/dL, för resp. C4 och C3).
däremot konstaterades antifosfolipidantikroppar vara negativt associerade med anti-ssa / Ro60 (tabell 3). Även om båda Anti-ro-positiva grupperna visade en liknande minskning av andelen patienter med antifosfolipidantikroppar, var den eller som erhölls i anti-Ro52/TRIM21-gruppen nästan 1 (0, 97), medan den motsvarande gruppen av anti-ssa/Ro60-positiva patienter var 0, 33., Detta fynd återspeglade förmodligen ett starkare engagemang av den samexisterande Anti-ssa/Ro60-reaktiviteten i det negativa sambandet med antifosfolipidantikroppar. Faktum är att en negativ statistiskt signifikant förening endast hittades för anti-ssa / Ro60 i den separata analysen av båda särdragen (eller 0.32, ci 95% 0.13–0.79 och eller 0.42, ci 95% 0.15–1.20, för anti-ssa/Ro60 och anti-Ro52/TRIM21 resp.). Bland de analyserade antifosfolipidantikropparna var Anti-Cl IgG/IgM och lupus antikoagulant (LA) de som befanns vara mest involverade i detta negativa förhållande (tabell 3)., Konsekvent med det som observerades vid analys av hela antifosfolipidgruppen visade sig endast Anti-ssa/Ro60 vara statistiskt signifikant associerat med anti-Cl IgG / IgM när de två Anti-Ro-antikropparna analyserades separat (eller 0, 29, ci 95% 0, 09–0, 92 och eller 0, 28, ci 95% 0, 06-1, 27, för anti-ssa/Ro60 och anti-Ro52/TRIM21 resp.). Föreningen med LA var inte statistiskt analyserat på grund av det mycket låga antalet positiva patienter med anti-SS-Ro60 (2 patienter) eller Ro52/TRIM21 antikroppar (1 patient).,
Anti-Sm var den enda analyserade immunologiska parametern som inte kunde associeras med anti-ssa / Ro60 eller anti-Ro52/TRIM21 (tabell 3).
3.4. Differentiell Association av Anti-SSA/Ro60 och Anti-Ro52/TRIM21 med Hematologiska Parametrar
för att bekräfta den tidigare observerade sambandet mellan anti-Ro52/TRIM21 och cytopeni, jämförde vi de nivåer av hematologiska parametrar vid tiden för analysen i 128 SLE-patienter på grund av deras anti-Ro52/TRIM21 status (Tabell 4). Av dessa patienter behandlades 110 (86, 6%) med antimalarials, 48 (37.,8%) med kortikosteroider och 30 (23,6%) med immunosuppressiva läkemedel (azatioprin, metotrexat eller mykofenolatmofetil). Ingen fick biologisk terapi. Genomsnittliga leukocytnivåer befanns vara signifikant lägre i gruppen patienter med anti-ro52 / TRIM21 antikroppar (). Denna effekt utövades huvudsakligen på lymfocyter eftersom anti-Ro52/TRIM21-positiva patienter visade signifikant lägre lymfocytnivåer än negativa patienter ()., Dessutom bekräftades sambandet mellan Anti-Ro52/TRIM21 och lymfopeni ytterligare genom logistisk regression justerad för kön, ålder och behandling vid tidpunkten för analysen (eller 2, 72, 95% KI 1, 08–6, 88 ).
däremot visade nivåerna av hematologiska parametrar ett annorlunda beteende (Tabell 5) när man överväger anti-ssa / Ro60. I själva verket sågs inga statistiskt signifikanta skillnader i någon leukocytpopulation, medan anti-ssa / Ro60-positiva patienter hade signifikant lägre hemoglobinnivåer än negativa patienter ()., Trots denna signifikanta skillnad låg den genomsnittliga hemoglobinnivån hos positiva patienter inom normalområdet. Å andra sidan var trombocytnivåerna nästan signifikant högre hos anti-ssa/Ro60-positiva patienter än hos negativa patienter (). Detta fynd kan påverkas av den negativa association som vi funnit mellan denna anti-Ro-specificitet och anti-Cl IgG/IgM-antikroppar som i sin tur är kända för att minska trombocytnivåerna. I själva verket visade positiva patienter för anti-Cl IgG / IgM en trend att ha lägre trombocytnivåer än negativa patienter (209, 8 ± 69, 3 × 103/µL mot 241, 1 ± 69.,6 × 103/µL, , resp.).
4. Diskussion
I detta arbete, anti-SSA/Ro60 och anti-Ro52/TRIM21 har visat sig att visa ett annat mönster av kliniska och immunologiska föreningar i SLE. Enligt det tidigare beskrivna förhållandet mellan anti-ssa / Ro60 och SLE befanns denna anti-Ro – specificitet vara positivt associerad med hypokomplementemi , en SLE-relaterad immunologisk egenskap., Å andra sidan observerades ett negativt samband mellan anti-Ro52/TRIM21 och anti-dsDNA, vilket överensstämmer med den högre prevalensen av denna antikropp vid andra autoimmuna tillstånd såsom SS, myosit, SSc och leversjukdomar .
båda Anti-Ro-reaktiviteterna visade också olika beteende när det gäller hematologiska abnormiteter. Således visade sig Anti-Ro52/TRIM21 vara signifikant associerat med lymfopeni, oberoende av den terapeutiska regimen, medan patienter med anti-ssa / Ro60 antikroppar visade högre trombocytantal och lägre hemoglobinnivåer än negativa patienter., Lymfopeni har tidigare varit relaterad till förekomsten av anti-ro-antikroppar i SLE och SS . Våra resultat stöder det specifika förhållandet mellan anti-Ro52/TRIM21 med lymfopeni i SLE som beskrivs i tidigare verk . Bland de olika lymfocytsubstanserna finns bevis för att CD4 + och NK-celler är involverade i lymfopeni associerad med anti-Ro eller, specifikt, med anti-Ro52/TRIM21 ., Ro52 / TRIM21-antigenet är ett cytoplasmatiskt protein som kan induceras och omfördelas till kärnan eller cellytan genom flera stress-och proinflammatoriska stimuli, såsom typ i och II IFNs, i olika celltyper inklusive lymfocyter . Intressant har ro52 / TRIM21-uttrycket visat sig vara uppreglerat i perifera blodmononukleära celler hos SLE-och SS-patienter ., Det är frestande att spekulera om att en proinflammatorisk miljö som är karakteristisk för systemiska autoimmuna sjukdomar kan inducera uttrycket av Ro52 / TRIM21 på lymfocytytan, vilket möjliggör bindning av specifika antikroppar som slutligen skulle orsaka celldöd. I detta avseende har det beskrivits att autologt serum innehållande Anti-Ro ökar celldöd genom apoptos i SLE lymfocytkulturer .
Anti-ro-antikroppar har tidigare visat sig vara associerade med en lägre prevalens av trombocytopeni hos SLE-patienter ., En möjlig roll för anti-ssa/Ro60-reaktiviteten i denna negativa förening stöds av trenden mot högre nivåer av trombocytnivåer hos anti-ssa / Ro60-positiva patienter än hos negativa patienter som observerats av oss. Våra data tyder dock på att denna skyddande effekt skulle vara indirekt och omvänt beroende av antifosfolipidantikroppsstatus. Faktum är att vi har funnit att anti-ssa/Ro60 var negativt associerat med antifosfolipid och anti-Cl IgG / IgM-antikroppar som i sin tur har relaterats till låga trombocytnivåer ., Våra data stöder också ett högre engagemang av anti-ssa/Ro60-specificiteten i den tidigare påpekade negativa föreningen av anti-Ro med anti-CL-antikroppar . Slutligen är den observerade negativa effekten av anti-ssa / Ro60 på hemoglobinnivåerna inte tillräcklig för att betraktas som anemi. Alla dessa fynd tyder således på att anti-ssa/Ro60 inte har någon patologisk effekt på någon hematologisk population i motsats till den som observerats för anti-Ro52/TRIM21.,
I likhet med vad som observerats i samband med lymfopeni konstaterades anti-Ro52/TRIM21 men inte anti-ssa / Ro60 vara positivt associerat med Raynauds fenomen. Detta förhållande var oberoende av förekomsten av anti-U1RNP, en antikropp som är känd för att vara relaterad till Raynauds fenomen även i SLE . Antikroppar mot Ro-systemet har också visat sig vara associerade med Raynauds fenomen i SS ., Stödja den specifika rollen som anti-Ro52 / TRIM21 i denna förening är det intressant att notera att denna antikropp har detekterats hos cirka 20% av patienterna med SSc, där Raynauds fenomen är en kardinal egenskap . Dessutom rapporterades anti-Ro52/TRIM21 också vara den näst vanligaste autoantikroppen i en SSC-kohort .
ljuskänslighet och xeroftalmi/xerostomia var de enda funktioner som visade sig vara positivt förknippade med både anti-ssa / Ro60 och anti-Ro52/TRIM21., Dessa föreningar var endast statistiskt signifikanta när båda autoantikropparna analyserades separat förmodligen på grund av det nära förhållandet mellan dem. Även om antikroppar mot Ro-systemet historiskt har ansetts vara associerade med ljuskänslighet, förblir detta förhållande kontroversiellt . Dessutom är lite känt om föreningen med de två olika reaktiviteterna ., Emellertid har ökat uttryck för SSA/Ro60 och Ro52 / TRIM21 observerats i cytoplasman eller cellytan av keratinocyter efter UV-bestrålning, vilket stöder förhållandet mellan ljuskänslighet och reaktivitet mot båda antigenerna .
å andra sidan är sambandet mellan xeroftalmi / xerostomi och anti-Ro tydligt fastställt hos SLE-patienter . I likhet med våra resultat har också en förening med anti-ssa/Ro60 eller anti-Ro52/TRIM21 rapporterats ., Dessa två Ro-antigener har rapporterats uttryckas i cellytan av humana duktala epitelceller under apoptos, vilket tyder på en roll av denna celldödsmekanism vid induktion av anti-ssa/Ro60-och anti-Ro52/TRIM21-svar . Vidare har specifika anti-ssa/Ro60-och anti-Ro52/TRIM21 B-celler med ett differentierande mönster som är kompatibelt med plasmaceller detekterats hos spytkörtlar hos SS-patienter .
5. Slutsatserna
Anti-SSA/Ro60 och anti-Ro52/TRIM21 visade ett annat mönster av kliniska och immunologiska föreningar i SLE., Förutom vanliga positiva föreningar med ljuskänslighet och xeroftalmi/xerostomi visade de två Anti-Ro-reaktiviteterna både positiva och negativa specifika föreningar. Anti-ssa / Ro60 visade sig vara positivt associerat med hypokomplementemi men negativt med antifosfolipidantikroppar, medan anti-Ro52 / TRIM21 visade ett positivt samband med lymfopeni och Raynauds fenomen och ett negativt samband med anti-dsDNA-antikroppar., Således ökar våra data bevis på de olika föreningarna av både anti-Ro-särdrag med specifika kliniska manifestationer även i en enda sjukdom.
intressekonflikt
författarna rapporterar ingen intressekonflikt.
bekräftelser
studien fick inget ekonomiskt stöd från någon organisation., Författarna tackar Thermo Fisher Scientific-Phadia GmbH för generöst ge autoantikropps-kit för den aktuella studien, Ana Ynés Martínez Paredes för hennes tekniskt bistånd, och Pablo Martinez Camblor från Medicinsk Undersökning Office (OIB-FICYT) av Asturien för den statistiska analysen. De är också speciellt tacksam Dr Carmen Gutiérrez och Asociación Lúpicos de Asturias för deras uppmuntran och stöd. Iván Cabezas-Rodríguez stöds av Río Hortega Programmet, Instituto de Salud Carlos III, Spanien.