flödescytometri vs Facs

flödescytometri vs FACS: Vad är skillnaden?

flödescytometri och FACS (fluorescensaktiverad cellsortering) är tydligt olika förfaranden, även om FACS är ett ättlingsprocedur baserat på flödescytometriprotokoll. Framsteg inom cellsorteringsteknik bidrar på ett stort sätt till molekylärvetenskapslandskapet., De övergripande bidragen från vad som lärs är vad som guidar den farmaceutiska upptäcktsprocessen i både en diagnostisk kapacitet och även terapeutiska strävanden som i sin tur leder till förbättrade patientresultat 1.

vad är flödescytometri?

flödescytometri är en metod som används för att undersöka och bestämma uttrycket av intracellulära molekyler och cellytan och för att definiera och karakterisera olika enskilda celltyper. Det används också för att bestämma cellvolymen, cellstorleken och utvärdera renheten hos subpopulationer som isoleras., Detta gör det möjligt för flera parametrar utvärdering av enskilda celler på ungefär samma gång.

en flödescytometri är ett kraftfullt instrument eftersom det möjliggör samtidig analys av både fysiska och kemiska egenskaper på upp till tusentals partiklar per sekund. Detta gör det till en snabb och kvantitativ metod för analys och rening i cellsuspension. Med hjälp av flöde kan vi bestämma fenotypen och funktionen och till och med Sortera levande celler., i

några av de mätapplikationer som tas via flödescytometri inkluderar:

• trombocytfunktion
• benmärg
• perifert blod

de två potentiella flödescytometridatauttryformaten inkluderar:

• perifert blod

de två potentiella flödescytometrydatauttrydatauttryformaten inkluderar:

histogram som mäter eller jämför endast en enda parameter,
• Dot-tomter som jämför 2 eller 3 parametrar samtidigt på en två – eller tredimensionell scatter-plot.

vad är FACS?,

FACS är en förkortning för fluorescensaktiverad enstaka cellsortering, vilket är en flödescytometriteknik som ytterligare lägger till en grad av funktionalitet. Genom att använda mycket specifika antikroppar märkta med fluorescerande konjugat (en fluorescerande molekyl som kallas fluorokrom) tillåter FACS-analys oss att samtidigt samla in data på och sortera ett biologiskt prov med ett nästan obegränsat antal olika parametrar. Precis som i konventionell flödescytometri samlas fram-scatter, sidospridning och fluorescerande signaldata in.,i

med hjälp av en flödescytometer maskin, celler eller andra partiklar suspenderade i en flytande ström passerar genom en laserstråle i en enda fil Mode, och interaktion med laserljuset mäts av en elektronisk ljusdetektor apparat som ljusspridning och fluorescensintensitet. Om en fluorescerande markör är bunden till en cellulär komponent, representerar fluorescensintensiteten helst mängden av den specifika flödescellskomponenten.

cellsortering via avancerad cellsorteringsinstrumentering utförs med hög specificitet och höga standarder., Forskare gillar att använda flödescytometrimetoderna eftersom det är det snabbaste och mest effektiva sättet att tillämpa mätning på hela cellprocessen. Operatören bestämmer eller väljer vissa parametrar för hur celler ska sorteras. i

vid denna tidpunkt ställer cellsorteringsmaskinen en elektrisk laddning på varje cell så att cellerna sorteras efter laddning (med hjälp av elektromagneter) i separata kärl när de lämnar flödeskammaren. Tekniken att fysiskt Sortera en heterogen blandning av celler i olika populationer är användbar för många terapeutiska och kliniska tillämpningar.,

förstå förhållandet mellan FACS och flödescytometri

för att uttrycka det förhållandet mellan FACS-analys och flödescytometri i enkelt sammanhang är de i grunden partners i cellanalysprocessen. FACS används som en cell sorterare och berikad för en delmängd av celler som ofta sedan studeras ytterligare i detalj med hjälp av flödescytometri eller andra analytiska tekniker2.

flödescytometri används för cellanalys och är inriktad på mätning av proteinuttryck eller samuttryck inom en blandad population av celler., Både flödescytometri och FACS är utvecklade för att differentiera celler enligt deras optiska filter.

den viktigaste skillnaden mellan de två cellkarakteriseringsmodaliteterna ligger i funktionaliteten hos den metod som används.

både flödescytometri och FACS tenderar att användas omväxlande. De är båda utvecklade för att differentiera celler enligt deras optiska egenskaper. Det finns dock vissa skillnader i metoder som är tydliga och har olika förfarandemässiga resultat., Används singularly resultaten är ensidiga, och används tillsammans, resultaten är uttryck data från flera cell parameter3.

–FACS är en process genom vilken en provblandning av celler sorteras enligt deras ljusspridning och fluorescens egenskaper i två eller flera behållare.

–flödescytometri är en metod som används vid analys av en heterogen population av celler enligt olika cellytmolekyler, storlek och volym som möjliggör undersökning av enskilda celler.,

-FACS tillsammans med flödescytometri kan mäta och karakterisera flera cellgenerationer genom att använda mycket specifika antikroppar märkta med fluorescerande färgämnen, en forskare kan utföra FACS-analys och samtidigt samla uttrycksdata och sortera cellprover med ett antal variabler.

hur flödescytometri och FACS används i kliniska tillämpningar

Immunfenotypning: ett av de vanligaste applikationsformaten som används är immunfenotypning. Detta är en metod som identifierar och kvantifierar flera populationer av celler i ett heterogent prov., Detta inkluderar perifert blod, benmärg och lymfmaterial. Immunofenotypning används främst i hematologiska inställningar för att diagnostisera vissa cancerformer, dvs malignt lymfom och / eller leukemi4.

cellsortering: framsteg i cellsorterare är inriktade på mild isolering av celler i separata rör. Specialiserade flödesmätare med förmåga att förhöra och karakterisera varje cell när den passerar genom lasern och uttrycka avgörande mätdata av cellen., Nyckeln här mäts också i kvantitativ mening – instrumenten kan hantera stora volymer som gör mikroskopisk undersökning föråldrad.

Cellcykelanalys: med flödescytometri och FACS kan cellen analyseras och mätas i alla fyra olika faser av hela cellcykeln. De cellbaserade analyserna kan sedan hjälpa till med bestämning av cellanomalier med hjälp av vissa fluorescerande färgämnen. Fältet av encellsgenomik använder båda dessa metoder för att studera en enda celltyp för en cellpopulation.,

apoptos: apoptos, eller programmerad celldöd, är en normal del av livscykeln för eukaryota celler. Celler dör av olika skäl: genom nekros, som orsakas av externa fysiska och kemiska förändringar i cellen eller genom apoptos, en process där celler initierar ett ”självmord” – program genom internt kontrollerade faktorer. Dessa två olika typer av celldöd, apoptos och nekros, kan identifieras via flödescytometrisk metod och användas för att bestämma morfologiska, biokemiska och molekylära förändringar som förekommer i döende celler.,

Cellproliferationstester: cellbaserade analyser är ett av de viktigaste verktygen för att mäta verkningsmekanismsvar på vissa stimuli som tillväxtfaktorer, cytokiner och andra mediakomponenter. Flödescytometern kan mäta proliferation genom att märka vilande celler med ett cellmembranfluorescerande färgämne, karboxifluoresceinsuccinimidylester (CFSE). När cellerna aktiveras börjar de proliferera och genomgå mitos. När cellerna delar sig, överförs hälften av det ursprungliga färgämnet till varje dottercell., Genom att mäta minskningen av fluorescenssignalen kan forskare beräkna cellulär aktivering och proliferation.

intracellulärt Kalciumflöde: celler interagerar commingle i sin miljö genom signaltransduktionsvägar. När dessa vägar aktiveras pumpar membranbundna kalciumjonkanaler kalcium i cellen och ökar snabbt den intracellulära kalciumkoncentrationen. De högre kalciumnivåerna ger cellen energi att reagera. Flödescytometern kan detektera flödet av kalcium i cellen och tillhandahålla detaljerade mätdata5.,

inslagning

expansionen av flödescytometriska tekniker för att utvärdera intracellulära egenskaper flyttar denna plattform till arenan för att bestämma cellfunktionen. Dessa nyare metoder expanderar nyttan av flödescytometri som ett värdefullt verktyg för en djupare förståelse av immunfunktionen och rollen hos vissa celler när det börjar avslöja indikatorer på apoptos., Genom att förbättra call livskraft genom förbättrad teknik och erkänna celldöd eller apoptos, tjänar tekniken till att hjälpa forskare att förstå varför det händer och de biokemiska förändringar som förekommer specifikt för varje fas av cellaktivitet. Kartläggning av signalvägar och DNA-fragmentering är en teknik som molekylära genetiker finner mycket värdefulla. mRNA-baserade terapeutiska lösningar verkar vara viktiga för att lösa några av gåtorna i samband med systemisk sjukdom6.,

När vi närmar oss att kunna utnyttja cellanalysprocessen via 3D-teknik, är det lätt att se hur den kunskap som vunnits kommer att leda till större innovation. Forskarsamhället ser fram emot att sträcka filten av molekylärvetenskap för att inkludera stamcellsteknik. Med stamceller och förmågan att klona dem effektivt och introducera dem till kroppen för att skapa systemförändring är där framtiden går., Vi kan se hur flödescytometri och olika metoder för FACS så småningom kommer att resultera i mer positiva patientresultat, terapeutiska ingrepp och kanske en dags fullständig lys av cancer tumörer. Genetisk sjukdom upptäcks snabbt och många nya upptäckter har startat en ny rörelse av biologisk och molekylär vetenskap7.

källor:

2 2https:/ / www.sciencedirect.,com/science/article/abs/pii/0022175981902532

3 https://sciencing.com/understand-flow-cytometry-results-5805206.html

4 https://www.cancer.gov/publications/dictionaries/cancer-terms/def/immunophenotyping

5 https://journals.sagepub.com/doi/abs/10.1177/1087057104264038

6 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4623474/

7 https://www.nature.com/scitable/topicpage/cdk-14046166/