Citometrie în Flux vs Facs

Citometrie în Flux vs FACS: Care este Diferența?

citometria în flux și FACS (fluorescence activated cell sorting) sunt proceduri distinct diferite, deși FACS este o procedură descendentă bazată pe protocoalele de citometrie în flux. Progresele în tehnologia de sortare a celulelor contribuie într-un mod mare la peisajul științei moleculare., General contribuții de ceea ce este învățat este ceea ce ghidează farmaceutice procesul de descoperire în ambele o capacității de diagnosticare și, de asemenea, încercări terapeutice care, la rândul său, duce la îmbunătățirea pacientului outcomes1. ce este citometria în flux?

citometria în flux este o metodă care este utilizată pentru a examina și a determina expresia moleculelor intracelulare și a suprafeței celulare și pentru a defini și caracteriza tipuri distincte de celule unice. Este, de asemenea, utilizat în determinarea volumului celular, dimensiunea celulei și evaluarea purității subpopulațiilor care sunt izolate., Aceasta permite evaluarea multi-parametru a celulelor individuale la aproximativ același timp.o citometrie de flux este un instrument puternic, deoarece permite analiza simultană a caracteristicilor fizice și chimice de până la mii de particule pe secundă. Acest lucru face o metodă rapidă și cantitativă pentru analiză și purificare în suspensie celulară. Folosind flow, putem determina fenotipul și funcția și chiar sorta celulele vii., am

de măsurare aplicații luate prin citometrie în flux include:

• funcția Trombocitelor
• măduvă Osoasă
• sângele Periferic

Cele două potențiale de citometrie în flux a datelor de expresie formate includ:

• histograme care măsura sau compara doar un singur parametru,
• dot-parcele care compara 2 sau 3 parametri simultan pe două sau trei-dimensional scatter-plot.

Ce este FACS?,

FACS este o abreviere pentru sortarea celulară activată prin fluorescență, care este o tehnică de citometrie în flux care adaugă în continuare un grad de funcționalitate. Prin utilizarea anticorpilor foarte specifici etichetați cu conjugate fluorescente (o moleculă fluorescentă numită fluorochrom), analiza FACS ne permite să colectăm simultan date și să sortăm o probă biologică cu un număr aproape nelimitat de parametri diferiți. La fel ca în citometria convențională a fluxului, sunt colectate date de împrăștiere înainte, dispersie laterală și semnal fluorescent.,am

cu Ajutorul unui citometru mașină, celule sau alte particule suspendate într-un lichid flux sunt trecute printr-un fascicul laser în singur fișier de moda, și interacțiunea cu lumina laser este măsurată de un dispozitiv electronic de lumina detector de aparate ca lumina scatter și intensitatea fluorescenței. Dacă un marker fluorescent este legat de o componentă celulară, intensitatea fluorescenței va reprezenta în mod ideal cantitatea acelei componente celulare de flux.

sortarea celulelor prin instrumente avansate de sortare a celulelor se realizează cu specificitate ridicată și standarde ridicate., Cercetătorilor le place să utilizeze metodele de citometrie în flux, deoarece este cel mai rapid și mai eficient mod de a aplica măsurarea întregului proces celular. Operatorul predetermină sau selectează anumiți parametri cu privire la modul în care trebuie sortate celulele. în acest moment, mașina de sortare a celulelor impune o sarcină electrică pe fiecare celulă, astfel încât celulele să fie sortate după sarcină (folosind electromagneți) în vase separate la ieșirea din camera de curgere. Tehnologia de sortare fizică a unui amestec eterogen de celule în diferite populații este utilă pentru multe aplicații terapeutice și clinice.,înțelegerea relației dintre FACS și citometria în flux pentru a pune relația dintre analiza FACS și citometria în flux în context simplu, aceștia sunt practic parteneri în procesul de analiză celulară. FACS este utilizat ca un sortator de celule și îmbogățit pentru un subset de celule, care este adesea apoi studiat în detaliu folosind citometrie de flux sau alte tehnici analitice2.

citometria în flux este utilizată pentru analiza celulară și se concentrează pe măsurarea expresiei sau coexprimării proteinei într-o populație mixtă de celule., Atât citometria în flux, cât și FACS sunt dezvoltate pentru a diferenția celulele în funcție de filtrele lor optice.distincția cheie între cele două modalități de caracterizare a celulelor constă în funcționalitatea metodei utilizate.

atât citometria în flux, cât și FACS tind să fie utilizate interschimbabil. Ambele sunt dezvoltate pentru a diferenția celulele în funcție de proprietățile lor optice. Cu toate acestea, există unele diferențe de metodologie care sunt distincte și au rezultate procedurale diferite., Utilizate în mod singular rezultatele sunt unilaterale și utilizate împreună, rezultatele sunt date de Expresie din mai mulți parametri celulari3.

–FACS este un proces prin care un amestec de probe de celule este sortat în funcție de caracteristicile lor de împrăștiere a luminii și fluorescență în două sau mai multe recipiente.

–citometria în flux este o metodologie care este utilizată în timpul analizei unei populații eterogene de celule în funcție de diferite molecule de suprafață celulară, dimensiune și volum, care permite investigarea celulelor individuale.,

-FACS împreună cu citometrie în flux poate măsura și caracteriza mai multe generații de celule cu ajutorul extrem de anticorpi specifici etichetate cu vopsele fluorescente, un cercetător poate efectua FACS analiză și simultan aduna expresie date și probe de celule de o serie de variabile.cum se utilizează citometria în flux și FACS în aplicațiile clinice Imunofenotiparea: unul dintre cele mai comune formate de aplicație utilizate este imunofenotiparea. Aceasta este o metodologie care identifică și cuantifică mai multe populații de celule într-un eșantion eterogen., Aceasta include sângele periferic, măduva osoasă și materialul limfatic. Imunofenotiparea este utilizată în principal în setările hematologice pentru a diagnostica anumite tipuri de cancer, adică limfom malign și/sau leucemie4.

Sortare celule: progresele în sortatoare de celule sunt orientate spre izolarea blândă a celulelor în tuburi separate. Debitmetre specializate cu capacitatea de a interoga și caracteriza fiecare celulă în timp ce trece prin laser și exprimă date de măsurare cruciale ale celulei., Cheia aici este măsurată și într – un sens cantitativ-instrumentația este capabilă să gestioneze volume mari care fac ca examinarea microscopică să fie depășită. analiza ciclului celular: cu citometria în flux și FACS, celula poate fi analizată și măsurată în toate cele patru faze distincte ale întregului ciclu celular. Testele pe bază de celule pot ajuta apoi la determinarea anomaliilor celulare utilizând anumiți coloranți fluorescenți. Domeniul genomicii cu o singură celulă utilizează ambele metode pentru a studia un singur tip de celulă pentru o populație de celule.,apoptoza: apoptoza sau moartea celulară programată este o parte normală a ciclului de viață al celulelor eucariote. Celulele mor dintr-o varietate de motive: prin necroză, cauzată de modificări fizice și chimice externe ale celulei sau prin apoptoză, un proces în care celulele inițiază un program de „sinucidere” prin factori controlați intern. Aceste două tipuri distincte de moarte celulară, apoptoza și necroza, pot fi identificate prin metodologia citometrică în flux și utilizate pentru a determina modificările morfologice, biochimice și moleculare care apar în celulele moarte.,testele de proliferare celulară: testele pe bază de celule sunt unul dintre instrumentele cheie pentru măsurarea răspunsurilor mecanismului de acțiune la anumiți stimuli, cum ar fi factorii de creștere, citokinele și alte componente media. La citometru de flux poate măsura proliferării de etichetare celule de odihnă cu o membrană celulară colorant fluorescent, carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE). Când celulele sunt activate, ele încep să prolifereze și să sufere mitoză. Pe măsură ce celulele se împart, jumătate din colorantul original este transmis fiecărei celule fiice., Prin măsurarea reducerii semnalului de fluorescență, cercetătorii pot calcula activarea și proliferarea celulară.fluxul intracelular de calciu: celulele interacționează în mediul lor prin căi de transducție a semnalului. Când aceste căi sunt activate, canalele ionice de calciu legate de membrană pompează calciul în celulă și cresc rapid concentrația intracelulară de calciu. Nivelurile mai mari de calciu furnizează celulei energie pentru a răspunde. Citometrul de flux este capabil să detecteze fluxul de calciu în celulă și să furnizeze date detaliate de măsurare5.,extinderea tehnicilor citometrice de curgere pentru a evalua caracteristicile intracelulare deplasează această platformă în arena determinării funcției celulare. Aceste abordări mai noi extind utilitatea citometriei în flux ca un instrument valoros pentru o înțelegere mai profundă a funcției imune și a rolului anumitor celule pe măsură ce începe să dezvăluie indicatori de apoptoză., Prin îmbunătățirea viabilității apelurilor prin tehnologie îmbunătățită și recunoașterea morții celulare sau a apoptozei, tehnologia servește pentru a ajuta cercetătorii să înțeleagă de ce se întâmplă și modificările biochimice care apar specifice fiecărei faze a activității celulare. Cartografierea căilor de semnal și fragmentarea ADN-ului este o tehnică pe care geneticienii moleculari o găsesc foarte valoroasă. soluțiile terapeutice bazate pe ARNm par a fi esențiale în rezolvarea unora dintre ghicitorile asociate bolii sistemice6., pe măsură ce ne apropiem de capacitatea de a exploata procesul analitic celular prin tehnologia 3D, este ușor de văzut cum cunoștințele dobândite vor duce la o mai mare inovație. Comunitatea de cercetare așteaptă cu nerăbdare să se întindă pătură științei moleculare pentru a include tehnologia celulelor stem. Cu celulele stem și capacitatea de a le clona în mod eficient și de a le introduce în organism pentru a crea schimbări de sistem este locul în care se îndreaptă viitorul., Putem vedea cum citometria de flux și metodologia diferită a FACS vor avea ca rezultat în cele din urmă rezultate mai pozitive ale pacientului, intervenții terapeutice și poate Liza completă de o zi a tumorilor canceroase. Boala genetică devine rapid descoperită, iar afișarea multor descoperiri noi a început o nouă mișcare a științei biologice și moleculare7.

surse:

2 2https:/ / www.sciencedirect.,com/science/article/abs/pii/0022175981902532

3 https://sciencing.com/understand-flow-cytometry-results-5805206.html

4 https://www.cancer.gov/publications/dictionaries/cancer-terms/def/immunophenotyping

5 https://journals.sagepub.com/doi/abs/10.1177/1087057104264038

6 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4623474/

7 https://www.nature.com/scitable/topicpage/cdk-14046166/