Resumo
Pouca informação existe sobre a associação de anti-SSA/Ro60 e anti-Ro52/TRIM21 com lúpus erytematosus (SLE) recursos. Neste trabalho, analisámos as associações de reactividades Anti-Ro com manifestações clínicas e imunológicas em 141 doentes com LES. Verificou-se que a fotossensibilidade e a xeroftalmia/xerostomia estão positivamente associadas a anti-SSA/Ro60 ( e , resp.) e anti-Ro52/TRIM21 (e, resp.)., Em contraste, foi detectada uma associação negativa relativamente aos anticorpos anti-fosfolípidos, anti-SSA/Ro60 com um efeito () mais forte do que anti-Ro52/TRIM21. Anti-SSA / Ro60 mostrou uma associação positiva específica com hipocomplementemia (), principalmente com baixos níveis de C4 (), enquanto anti-Ro52/TRIM21 foi encontrado para ser positivamente associado com o fenômeno de Raynaud () e citopenia () e negativamente associado com anti-dsDNA (). Os linfócitos estão envolvidos na relação entre anti-Ro52/TRIM21 e citopenia, uma vez que os doentes positivos apresentaram níveis celulares mais baixos do que os doentes negativos ()., Em conclusão, os anti-SSA / Ro60 e anti-Ro52/TRIM21 mostraram associações comuns e específicas em Les. Estes dados aumentam assim a evidência das diferentes associações das duas especificidades Anti-Ro, mesmo numa doença específica.
1. Introdução
Anti-SSA / Ro60 e anti-Ro52 / TRIM21 estão entre os auto-anticorpos mais frequentemente detectados no rastreio de rotina de doenças auto-imunes sistémicas., Apesar de ambos os anticorpos reactividades foram considerados para formar parte do anti-sistema do Ro por um longo tempo, agora é claramente estabelecido que os seus antigénios são diferentes, não fazem parte de uma união estável complexo macromolecular, e estão localizadas em diferentes compartimentos celulares (revisados ). Além disso, os anticorpos anti-SSA/Ro60 e anti-Ro52/TRIM21 também foram associados a um padrão diferente de manifestações clínicas., Assim, a presença anti-SSA / Ro60 está relacionada com processos autoimunes, principalmente lúpus eritematoso sistêmico (SLE) e síndrome de Sjögren (SS), enquanto anti-Ro52/TRIM21 mostra um amplo espectro de associações de doenças . As principais entidades clínicas auto-imunes associadas com anti-Ro52/TRIM21 são SS, esclerose sistémica (SSc), doenças auto-imunes hepáticas e, especialmente, miosite, onde tem sido considerado como um marcador independente . Além disso, foi detectado um anti-Ro52/TRIM21 em condições não auto-imunes, tais como infecções e doenças neoplásicas ., Além disso, foram também notificadas diferentes associações com manifestações clínicas específicas, especialmente para o anti-Ro52/TRIM21. De facto, esta reactividade Anti-Ro está fortemente associada a um bloqueio cardíaco congénito no lúpus neonatal e a uma doença pulmonar intersticial . O Anti-Ro52 / TRIM21 também foi relacionado com uma doença mais grave na SS, miosite, cirrose biliar primária e hepatite auto-imune .entre as doenças auto-imunes sistémicas, a les apresenta um padrão específico de anticorpos anti-Ro., Assim, embora a reactividade simultânea seja o padrão de anticorpos mais frequente, esta doença mostra a maior prevalência de anti-SSA/Ro60 isolados . Na Les, os anticorpos contra o sistema Ro têm sido historicamente associados à fotossensibilidade, mas pouca informação existe sobre a associação de ambas as reactividades Anti-Ro com outras manifestações clínicas ., Por conseguinte, tendo em conta este contexto, o objectivo deste trabalho foi analisar se os anticorpos anti-SSA/Ro60 e anti-Ro52/TRIM21 estão diferencialmente associados aos critérios de classificação clínica e a outras manifestações frequentes de Les. 2. Doentes e métodos
2, 1. Foram seleccionados para este estudo os doentes, a selecção de Soros e as características analisadas
soros de 141 doentes com LES (131 mulheres, Idade Média no diagnóstico 36, 7 ± 14, 5 anos) que cumpriram os critérios do American College of Rheumatology (ACR)., Estes pacientes foram acompanhados na unidade de Doenças auto-imunes de Medicina Interna, Hospital Universitario Central de Asturias, e suas características clínicas e imunológicas foram registradas em uma base de dados de pacientes com LES estabelecida em nossa região a partir de 2004, que é periodicamente atualizada . As características registadas nesta base de dados incluíam os critérios de classificação ACR e outras manifestações de Les relacionadas ou parâmetros imunológicos. Neste trabalho, todas as características exceto citopenia foram registradas cumulativamente., A citopenia foi considerada no diagnóstico para evitar a influência do tratamento nos parâmetros hematológicos. Apenas foram analisadas estatisticamente as características cuja prevalência foi superior a 10%. Em particular, as características incluídas na análise foram os critérios de classificação ACR, alopecia não carring, xeroftalmia/xerostomia, fenômeno de Raynaud, e hipocomplementemia. Todos os critérios de classificação foram definidos como indicado nos critérios ACR de 1996, com excepção de doenças neurológicas., Nesta manifestação de Les, A síndrome Orgânica do cérebro, distúrbios visuais e doenças nervosas periféricas e cranianas também foram consideradas ao lado de convulsões e psicose. Hypocomplementemia foi definido como tendo baixa C3 e/ou C4 níveis (<0,8 mg/dL e <0,15 mg/dL, respectivamente.). o último soro de cada doente foi seleccionado para o estudo (período de colheita de fevereiro de 2007 a março de 2011). A Idade Média no momento da análise foi de anos.
2, 2., A determinação dos auto-anticorpos, dos parâmetros complemento e hematológicos
a determinação dos anticorpos anti-SSA/Ro60 e anti-Ro52/TRIM21 nos 141 doentes com LES seleccionados foi efectuada por imunoensaio da enzima fluoro (Therno Fisher Scientific-Phadia GmbH, Freiburg, Alemanha). O ensaio foi realizado com um analisador automático ImmunoCAP 250. Em todos os doentes, foram também determinadas simultaneamente com a mesma metodologia outras especificidades de ESL (anti-dsDNA, SS-B/La, U1RNP e Sm) e anticorpos IgG e IgM da anticardiolipina (CL)., Os níveis C3 E C4 foram medidos por nefelometria (Beckman Coulter Inc., California, USA).
Níveis de hematológico parâmetros quantificados utilizando um Advia 2120 analyzer (Siemens Healthcare, Erlangen, Alemanha), estavam disponíveis no momento da determinação de autoanticorpos em 128 pacientes (119 do sexo feminino; a média de idade no diagnóstico e na análise e anos, respectivamente.). Leucopenia, lymphopenia, e trombocitopenia foram considerados de acordo com o ACR critérios (<4.00 × 103/µL <1.50 × 103/µL, e <100.00 × 103/µL, respectivamente.,) e a anemia foi definida por uma concentração de hemoglobina de <de 11,0 mg/dL em mulheres e <12.0 mg/dL em homens.
2, 3. Análise estatística
a associação da presença de anti-SSA/Ro60 e anti-Ro52/TRIM21 com manifestações de Les foi analisada por regressão logística binária ajustada para sexo e idade no diagnóstico e no momento da análise., Anteriormente, a presença de ambas as especificidades Anti-Ro e de anticorpos anti-dsDNA, SSB/La, RNP, Sm e CL foi simultaneamente analisada pelo procedimento de regressão logística passo-a-passo para mostrar a sua influência em cada manifestação clínica e parâmetro imunológico. Quando apropriado, outros auto-anticorpos encontrados como estatisticamente influentes foram incluídos na análise de regressão logística binária de associações anti-SSA/Ro60 e anti-Ro52/TRIM21. Nesta análise, ambas as reatividades Anti-Ro foram primeiramente incluídas como variáveis independentes., A fim de evitar efeitos de multicolinaridade causados pela estreita relação existente entre ambas as especificidades, foi realizada uma análise separada de anticorpos quando foi encontrada uma associação não estatisticamente significativa. Foram calculados os rácios de probabilidades (ou) e o seu intervalo de confiança de 95% (IC). Os níveis de complemento e parâmetros hematológicos foram comparados pelos testes do estudante ou Mann-Whitney de acordo com a distribuição de dados. Os resultados foram considerados estatisticamente significativos quando o valor foi <0,05. A análise estatística foi realizada utilizando SPSS 15.,0 pacote de software estatístico (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
3. Resultados
3.1. A prevalência de Anti-SSA/Ro60 e Anti-Ro52/TRIM21 em Doentes com LES
A presença de anti-SSA/Ro60 e/ou anti-Ro52/TRIM21 anticorpos foram detectados em 62 dos 141 SLE pacientes analisados (44.0%). A reactividade simultânea foi o principal padrão de anticorpos observado, sendo 37 doentes positivos para ambos os anticorpos (26, 2%). A reactividade anti-SSA/Ro60 isolada esteve presente em 23 (16, 3%), enquanto que a reactividade anti-Ro52/TRIM21 isolada só foi encontrada em dois doentes (1, 4%)., Assim, o padrão de anticorpos nesta série de doentes estava de acordo com a relação estabelecida entre anti-SSA/Ro60 e SLE e não estava associado nem com a idade no diagnóstico nem com a prevalência do sexo (Tabela 1).
3, 2. As associações de Anti-SSA/Ro60 e Anti-Ro52/TRIM21 com Manifestações Clínicas no LES
Quando o anti-SSA/Ro60 e anti-Ro52/TRIM21 foram simultaneamente incluídos como variáveis independentes na análise de regressão, a única associação significativa encontrada foi a citopenia com anti-Ro52/TRIM21 (Tabela 2)., Devido a esta constatação, também analisaram a relação entre estes auto-anticorpos e os diferentes tipos de hematológico ACR critérios, e uma tendência para uma associação entre anti-Ro52/TRIM21 e leucopenia/lymphopenia foi observado (Tabela 2). A trombocitopenia não pôde ser analisada uma vez que todos os doentes com anticorpos anti-Ro trombocitopénicos foram positivos para ambas as especificidades (4 em 4), nem foi analisada a anemia hemolítica devido ao baixo número de doentes (apenas cinco) com esta doença sanguínea., da mesma forma que a citopenia, úlceras orais e o fenómeno de Raynaud foram também considerados positivos, embora não significativamente, associados com anti-Ro52/TRIM21 (Tabela 2). Quando anti-Ro52 / TRIM21 foi analisado separadamente sem incluir anti-SSA / Ro60 como outra variável independente, apenas a associação com o fenômeno de Raynaud se tornou estatisticamente significante (ou 2,46, CI 95% 1, 11–5, 43 ). nenhuma das restantes manifestações clínicas mostrou uma associação significativa com anti-SSA/Ro60 e/ou anti-Ro52/TRIM21, quer ambos os anticorpos fossem analisados simultaneamente ou separadamente.,
3, 3. As associações de Anti-SSA/Ro60 e Anti-Ro52/TRIM21 com Parâmetros Imunológicos no LES
Anti-SSA/Ro60 e anti-Ro52/TRIM21 também mostrou uma diferente associação com LES relacionados com parâmetros imunológicos. Na verdade, quando as duas reactividades Anti-Ro foram consideradas em conjunto como variáveis independentes, observou-se um comportamento oposto relativamente à presença de anticorpos anti-dsDNA e hipocomplementemia, estando os anti-SSA/Ro60 positivamente associados e anti-Ro52/TRIM21 negativamente associados (Tabela 3)., No entanto, o único associações encontradas diferenças estatisticamente significativas foram a relação negativa entre anti-Ro52/TRIM21 e anti-dsDNA anticorpos e o positivo entre anti-SSA/Ro60, e hypocomplementemia. Ambos os níveis C3 E C4 foram considerados positivamente associados com anti-SSA / Ro60, mas apenas a associação com C4 foi estatisticamente significante. Além disso, os níveis desta fracção complementar, mas não os da C3, foram também significativamente mais baixos em doentes anti-SSA/Ro60 positivos do que em doentes negativos no momento da determinação do autoanticorpo (0, 16 ± 0.,06 mg / dL versus mg/dL, e mg/dL versus mg / dL, para, resp., C4 E C3).por outro lado, verificou-se que os anticorpos antifosfolípidos estavam negativamente associados aos anti-SSA/Ro60 (Quadro 3). Apesar de ambos os anti-Ro positivo grupos mostraram uma diminuição semelhante a porcentagem de pacientes com anticorpos antifosfolípides, OU obtido no anti-Ro52/TRIM21 grupo foi de cerca de 1 (0.97), enquanto que a correspondente ao grupo de anti-SSA/Ro60 positivo pacientes foi de 0,33., Este resultado provavelmente reflectiu um maior envolvimento da reactividade anti-SSA/Ro60 coexistente na relação negativa com anticorpos antifosfolípidos. Na verdade, a negativa de uma associação estatisticamente significativa foi encontrada apenas para anti-SSA/Ro60 na análise separada de ambos os especificidades (OU 0.32, IC 95% 0.13–0.79, e OU 0,42, IC 95% 0,15–de 1.20, para o anti-SSA/Ro60 e anti-Ro52/TRIM21 resp.). Entre os anticorpos antifosfolípidos analisados, os anticoagulantes Anti-CL IgG/IgM e lupus (LA) foram os que se verificou estarem mais envolvidos nesta relação negativa (Quadro 3)., De forma consistente com aquele observado quando da análise de todo o antifosfolípide grupo, apenas anti-SSA/Ro60 foi encontrado para ser estatisticamente significativa associada a anti-CL IgG/IgM quando os dois anti-Ro anticorpos foram analisados separadamente (OU 0.29, IC 95% 0.09–0.92, e OU 0.28, IC 95% 0.06–1.27, para o anti-SSA/Ro60 e anti-Ro52/TRIM21 resp.). A associação com LA não foi estatisticamente analisada devido ao número muito baixo de doentes positivos com anticorpos anti-SS-Ro60 (2 doentes) ou Ro52/TRIM21 (apenas 1 doente).,
Anti-Sm foi o único parâmetro imunológico analisado que não foi associado nem ao anti-SSA/Ro60 nem ao anti-Ro52 / TRIM21 (Quadro 3).
3, 4. Diferencial de Associação de Anti-SSA/Ro60 e Anti-Ro52/TRIM21 com Parâmetros Hematológicos
para confirmar o anteriormente observado associação entre anti-Ro52/TRIM21 e citopenia, comparamos os níveis de parâmetros hematológicos no momento da análise em 128 doentes com LES com base no seu anti-Ro52/TRIM21 estado (Tabela 4). Destes doentes, 110 (86, 6%) foram tratados com antimalários, 48 (37.,8%) com corticosteróides e 30 (23, 6%) com fármacos imunossupressores (azatioprina, metotrexato ou micofenolato de mofetil). Nenhuma estava a receber terapia biológica. Verificou-se que os níveis médios de leucócitos eram significativamente mais baixos no grupo de doentes com anticorpos anti-Ro52/TRIM21 (). Este efeito exerceu-se principalmente nos linfócitos, uma vez que os doentes anti-Ro52/TRIM21 positivos mostraram níveis de linfócitos significativamente mais baixos do que os doentes negativos ()., Além disso, a associação entre anti-Ro52/TRIM21 e lymphopenia foi confirmado pela regressão logística ajustada para sexo, idade e tratamento no momento da análise (OU 2.72, IC 95% 1.08–6.88, ).
em contraste, ao considerar anti-SSA / Ro60, os níveis de parâmetros hematológicos mostraram um comportamento diferente (Tabela 5). De facto, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas relativamente a qualquer população de leucócitos, enquanto que os doentes anti-SSA/Ro60 positivos apresentaram valores de hemoglobina significativamente inferiores aos doentes negativos ()., Apesar desta diferença significativa, o valor médio da hemoglobina em doentes positivos situou-se dentro do intervalo normal. Por outro lado, os níveis plaquetários foram quase significativamente mais elevados em doentes anti-SSA/Ro60 positivos do que em doentes negativos (). Este achado pode ser influenciado pela associação negativa encontrada por nós entre esta especificidade anti-Ro e anticorpos anti-CL IgG/IgM que, por sua vez, são conhecidos por diminuir os níveis de plaquetas. De facto, os doentes positivos para a IgG/IgM anti-CL mostraram uma tendência para terem níveis de plaquetas mais baixos do que os doentes negativos (209,8 ± 69,3 × 103/µL versus 241,1 ± 69.,6 × 103/µL, resp.).4. Discussão
neste trabalho, os anti-SSA/Ro60 e anti-Ro52/TRIM21 demonstraram apresentar um padrão diferente de associações clínicas e imunológicas em Les. De acordo com a relação anteriormente descrita entre anti-SSA/Ro60 e SLE , esta especificidade anti-Ro foi considerada positivamente associada a hipocomplementemia, uma característica imunológica relacionada com SLE., Por outro lado, foi observada uma associação negativa entre anti-Ro52/TRIM21 e anti-dsDNA que é consistente com a maior prevalência deste anticorpo em outras condições auto-imunes, tais como SS, miosite, SSc e doenças hepáticas . ambas as reactividades anti-Ro também apresentaram comportamentos diferentes no que respeita a anomalias hematológicas. Assim, verificou-se que o anti-Ro52/TRIM21 estava significativamente associado à linfopenia, independentemente do regime terapêutico, enquanto que os doentes com anticorpos anti-SSA/Ro60 apresentaram um número de plaquetas superior e níveis de hemoglobina inferiores aos doentes negativos., A linfopenia foi anteriormente relacionada com a presença de anticorpos anti-Ro na les E SS . Os nossos resultados apoiam a relação específica de anti-Ro52 / TRIM21 com linfopenia na les descrita em trabalhos anteriores . Entre os diferentes subconjuntos linfocitários, existe evidência de que as células CD4+ e NK estão envolvidas na linfopenia associada ao anti-Ro ou, especificamente, ao anti-Ro52/TRIM21 ., O antigénio Ro52 / TRIM21 é uma proteína citoplásmica que pode ser induzida e redistribuída para o núcleo ou para a superfície celular por vários estímulos de estresse e pró-inflamatório, tais como IFNs tipo I e II, em diferentes tipos celulares, incluindo linfócitos . Curiosamente, a expressão “Ro52/TRIM21” demonstrou ser upregulada em células mononucleares do sangue periférico de doentes com LES e SS ., É tentador especular que uma pró-inflamatórias, ambiente característico de doenças auto-imunes sistémicas poderia induzir a expressão de Ro52/TRIM21 na superfície do linfócito permitindo assim a ligação de anticorpos específicos que, finalmente, causar a morte da célula. A este respeito, foi descrito que os soros autólogos contendo anti-Ro aumentam a morte celular por apoptose em culturas de linfócitos les . anteriormente, verificou-se que os anticorpos Anti-Ro estavam associados a uma menor prevalência de trombocitopenia em doentes com LES ., Um possível papel da reactividade anti-SSA/Ro60 nesta associação negativa é suportado pela tendência para níveis mais elevados de plaquetas em doentes anti-SSA/Ro60 positivos do que em doentes negativos observados por nós. No entanto, os nossos dados sugerem que este efeito protector seria indirecto e inversamente dependente do Estado de anticorpos antifosfolípidos. De facto, descobrimos que o anti-SSA/Ro60 foi associado negativamente aos anticorpos antifosfolipídicos e anti-CL IgG/IgM que, por sua vez, têm sido relacionados com baixos níveis de plaquetas ., Os nossos dados também suportam um maior envolvimento da especificidade anti-SSA/Ro60 na associação negativa anteriormente apontada de anti-Ro com anticorpos anti-CL . Por último, o efeito negativo observado do anti-ASC/Ro60 nos níveis de hemoglobina não é suficiente para ser considerado anemia. Assim, todos estes resultados sugerem que o anti-SSA/Ro60 não tem efeito patológico em qualquer população hematológica, em contraste com o observado para o anti-Ro52/TRIM21.,
semelhante ao observado em relação à linfopenia, o anti-Ro52/TRIM21 mas não anti-SSA / Ro60 foi considerado positivamente associado ao fenómeno de Raynaud. Esta relação foi independente da presença de anti-U1RNP, um anticorpo conhecido por estar relacionado ao fenômeno de Raynaud mesmo em Les . Anticorpos contra o sistema Ro também foram encontrados para ser associado com o fenômeno de Raynaud em SS ., Apoiando o papel específico do anti-Ro52 / TRIM21 nesta associação, é interessante notar que este anticorpo foi detectado em aproximadamente 20% dos pacientes com SSc, onde o fenômeno de Raynaud é uma característica cardinal . Além disso, foi também referido que o anti-Ro52/TRIM21 era o segundo autoanticorpo mais comum numa coorte SSc .
Fotossensibilidade e xerophthalmia/xerostomia foram as únicas características positivamente associados com tanto anti-SSA/Ro60 e anti-Ro52/TRIM21., Estas associações só foram estatisticamente significativas quando ambos os auto-anticorpos foram analisados separadamente, provavelmente devido à estreita relação existente entre eles. Embora os anticorpos contra o sistema Ro tenham sido historicamente considerados associados à fotossensibilidade, esta relação permanece controversa . Além disso, pouco se sabe sobre a associação com as duas reatividades diferentes ., No entanto, observou-se uma expressão melhorada de SSA/Ro60 e Ro52/TRIM21 no citoplasma ou na superfície celular dos queratinócitos após irradiação UV, apoiando assim a relação entre fotossensibilidade e reactividade contra ambos os antigénios .por outro lado, a associação entre xeroftalmia/xerostomia e anti-Ro está claramente estabelecida em doentes com LES . Semelhante às nossas descobertas, foi também relatada uma associação com anti-SSA/Ro60 ou anti-Ro52/TRIM21 ., Estes dois antigénios Ro foram referidos como sendo expressos na superfície celular das células epiteliais ductais humanas durante a apoptose, sugerindo assim um papel deste mecanismo de morte celular na indução das respostas anti-SSA/Ro60 e anti-Ro52/TRIM21 . Além disso, foram detectadas células anti-SSA/Ro60 específicas e células anti-Ro52/TRIM21 B com um padrão de diferenciação compatível com as células plasmáticas em glândulas salivares de doentes com SS .
5. Conclusões
Anti-SSA / Ro60 e anti-Ro52/TRIM21 mostraram um padrão diferente de associações clínicas e imunológicas em Les., Para além de associações positivas comuns com fotossensibilidade e xeroftalmia/xerostomia, as duas reactividades Anti-Ro mostraram associações específicas positivas e negativas. Anti-SSA/Ro60 foi positivamente associado com hypocomplementemia mas negativamente com anticorpos antifosfolípides, enquanto que o anti-Ro52/TRIM21 mostrou uma associação positiva com lymphopenia e fenômeno de Raynaud e uma relação negativa com anti-dsDNA anticorpos., Assim, nossos dados aumentam a evidência sobre as diferentes associações de ambas as especificidades anti-Ro com manifestações clínicas específicas, mesmo em uma única doença.
conflito de interesses
os autores não relatam conflito de interesses.o estudo não recebeu apoio financeiro de nenhuma organização., Os autores agradecem a Thermo Fisher Scientific-Phadia GmbH para, generosamente, a prestação de autoanticorpos kits para o presente estudo, Ana Ynés Martínez Paredes para sua assistência técnica, e Pablo Martínez Camblor de Biomédico de Investigação Office (OIB-FICYT) do Principado das Astúrias para a análise estatística. Eles também estão especialmente gratos à Dra. Carmen Gutiérrez e à Asociación Lúpicos de Asturias por Seu encorajamento e apoio. Iván Cabezas-Rodríguez é apoiado pelo Programa Río Hortega, Instituto de Salud Carlos III, Espanha.