Dolina Ohio zazwyczaj odnosi się do Doliny rzeki Ohio lub obszaru, który otacza legendarną rzekę. Niektórzy ludzie będą używać skrótu Doliny Ohio, aby odnieść się konkretnie do górnej części doliny rzeki Ohio, a nie całego biegu rzeki. Największy dopływ rzeki Missisipi, Rzeka Ohio, przepływa przez sześć stanów i ma długość 981 Mil. Rozpoczyna się w Pensylwanii i tworzy granice wzdłuż Ohio, Wirginii Zachodniej, Indiany, Kentucky i Illinois.,
Rzeka Ohio powstała w wyniku zalania jeziora polodowcowego we wcześniejszych wiekach. Łączy dwie nieistniejące już rzeki: Steubenville River i Amarietta River. Powiększyło to wcześniej niewielką dolinę Marietty. W ciągu kilku epok lodowcowych Rzeka Ohio osuszyła jeziora polodowcowe i była wypełniona wodami powodziowymi z topniejących lodowców, aż osiągnęła rozmiary epoki nowożytnej.
Ohio zasilane jest głównie rzeką Allegheny, której źródło znajduje się w Allegheny Township w Pensylwanii. Drugim źródłem jest rzeka Monogahlea w Fairmont w Wirginii Zachodniej., Ujście rzeki Ohio, gdzie uchodzi do Missisipi, znajduje się w miejscu, gdzie w stanie Illinois spotyka się z hrabstwem Ballard w stanie Kentucky. Po drodze ma blisko kilkanaście dopływów, które zasilają rzekę. Są to rzeki Kentucky, Tennessee, Cumberland, Great Miami River, Kanawha i Big Sandy River.
W czasie dużych spływów i powodzi może osiągnąć ponad 1,8 miliona stóp sześciennych na sekundę.
Dolina Ohio odgrywała ważną rolę w historii., Od prekolumbijskich osadników przez francuskich odkrywców i kupców i Brytyjczyków do współczesnych miast amerykańskich, ludzie liczyli na żyzne ziemie otaczające rzekę, aby przetrwać. Strategiczne znaczenie militarne rzeki było również cenione w różnych okresach historii. Podczas wojny secesyjnej służyła jako granica między niewolnikami a wolnymi państwami.