nioms microbiologisch laboratorium is goedgekeurd als een klasse 2 laboratorium van het Noorse ministerie van Volksgezondheid en is goedgekeurd voor het werken met bevatte GGM (genetisch gemodificeerde micro-organismen). Het laboratorium is uitgerust met faciliteiten voor antibacteriële testen en groei van biofilm op materialen oppervlakken.
Biofilm
Biofilm wordt gekweekt op biomateriaal in microtiterputten of in een biofilmreactor. Antibacteriële verbindingen kunnen worden opgenomen in of gecoat op het oppervlak van het biomateriaal., Verschillende technieken worden gebruikt om hun effect op de vorming en de groei van biofilm te bestuderen. De hoeveelheid biofilm kan worden gekwantificeerd na het bevlekken van safranine, en ook door elektronenmicroscopie worden gevisualiseerd. De levensvatbaarheid van de biofilm kan worden bepaald door levende/dode kleuring en fluorescentie/confocale microscopie, resazurin assay, XTT assay of door levensvatbaarheid tellen na het losmaken van de biofilm gevolgd door plating op voedingsagar platen.
De methode Colony Forming Unit (CFU) kan worden gebruikt voor de identificatie van micro-organismen en voor het testen van het effect van antimicrobiële stoffen en technieken., Het is een gevoelige en algemeen aanvaarde methode binnen microbiologie. Bij deze methode wordt het aantal levende cellen (cellen die kunnen reproduceren) dat aanwezig is in een suspensie geteld op een voedingsagaroppervlak.
bacteriecellen worden verzameld en gedispergeerd in een niet-toxische oplossing zoals fosfaatgebufferde zoutoplossing of fysiologische water. De celsuspensie wordt dan verdund, normaal in een reeks met een 10-voudige verdunning, om platen met een aftelbaar aantal bacteriën te verkrijgen., Een bepaalde hoeveelheid van elke verdunning wordt, in duplo ‘ s van 3 of 4, op petrischaaltjes geplateerd met voor de betrokken bacteriën bestemde voedingsagar. De petrischalen worden in geschikte omgevingen en gedurende een passende tijd geïncubeerd voordat kolonies worden geteld. Elke kolonie die kan worden geteld wordt een kolonie vormende eenheid (CFU) genoemd, en het aantal CFU ‘ s is gerelateerd aan het levensvatbare aantal bacteriën in het monster. Het aantal bacteriën in het oorspronkelijke monster wordt wiskundig berekend, rekening houdend met de vergulde hoeveelheid en de verdunningsfactor., De resultaten worden vaak gepresenteerd als CFU / ml (kolonievormende eenheden per milliliter) voor vloeistoffen, en CFU/g (kolonievormende eenheden per gram) voor vaste stoffen.
spiraal plating techniek
de traditionele methode met verdunnen en plating is tijdrovend en daarom kan het aantal variabelen in een test beperkt zijn. Het microbiologisch laboratorium van NIOM maakt daarom gebruik van een spiraal plating techniek waarbij een instrument, de WESP spiraal plater (figuur 1), deponeert een bepaald volume monster op een roterende agar plaat.,
het volume van het afgezette Monster per plaateenheid neemt over de spiraal af, wat resulteert in een verdunningseffect, waardoor geïsoleerde kolonies kunnen worden geteld (Figuur 2) in de respectieve sectoren van het bekende depositie-volume.
voor het tellen van bacteriën gebruikt NIOM een geautomatiseerde kolonieteller, acoliet, en de resultaten worden direct naar Excel overgebracht voor verdere analyse.