Flow Cytometry vs Facs

Flow Cytometry vs FACS: Wat is het verschil?

Flow cytometry en FACS (fluorescentie geactiveerde cel sortering) zijn duidelijk verschillende procedures hoewel FACS een afstammingsprocedure is gebaseerd op flow cytometry protocollen. Vooruitgang in celsorteertechnologie draagt in grote mate bij aan het moleculaire wetenschapslandschap., De Algemene bijdragen van wat wordt geleerd is wat leidt het farmaceutische ontdekkingsproces in zowel een diagnostische capaciteit als ook therapeutische inspanningen die op zijn beurt leidt tot betere patiënt outcomes1.

Wat is Flow Cytometry?de cytometrie van

De Stroom is een methode die wordt gebruikt om de uitdrukking van intracellular molecules en de celoppervlakte te onderzoeken en te bepalen en om verschillende eencellige types te definiëren en te karakteriseren. Het wordt ook gebruikt in het bepalen van het celvolume, de celgrootte en het evalueren van de zuiverheid van subpopulaties die worden geà soleerd., Hierdoor kan de multi-parameter evaluatie van individuele cellen op ongeveer hetzelfde moment.

een flowcytometrie is een krachtig instrument omdat het gelijktijdige analyse van zowel fysische als chemische kenmerken van maximaal duizenden deeltjes per seconde mogelijk maakt. Dit maakt tot het een snelle en kwantitatieve methode voor analyse en zuivering in celsuspensie. Met flow kunnen we het fenotype en de functie bepalen en zelfs levende cellen Sorteren., ik

Sommige van de meting in behandeling genomen aanvragen via flowcytometrie zijn:

• functie van de Bloedplaatjes
• beenmerg
• Perifere bloed,

De twee potentiële flowcytometrie gegevens expressie formaten zijn:

• histogrammen die maatregel te vergelijken of slechts een enkele parameter,
• dot-percelen die vergelijk 2 of 3 parameters tegelijkertijd op een twee – of drie-dimensionale scatter-plot.

Wat is FACS?,

FACS is een afkorting voor fluorescentie-geactiveerde eencellige sortering, een cytometrietechniek die een graad van functionaliteit toevoegt. Door hoogst specifieke antilichamen te gebruiken die met fluorescente geconjugeerde (een fluorescente molecule genoemd fluorochrome) worden geëtiketteerd, staat de FACSANALYSE ons toe om gelijktijdig gegevens te verzamelen over, en een biologische steekproef door een bijna onbeperkt aantal verschillende parameters te sorteren. Enkel zoals in conventionele cytometry stroom, worden voorwaarts-verstrooit, zij-verstrooit, en fluorescente signaalgegevens verzameld.,I

met behulp van een flowcytometermachine worden cellen of andere deeltjes die in een vloeibare stroom zijn gesuspendeerd in één bestand door een laserstraal geleid en wordt de interactie met het laserlicht gemeten door een elektronisch lichtdetectorapparaat als lichtverstrooiing en fluorescentieintensiteit. Als een fluorescente teller aan een cellulaire component wordt gebonden, zal de fluorescentieintensiteit idealiter de hoeveelheid vertegenwoordigen die bepaalde component van de stroomcel.

Het sorteren van cellen via geavanceerde instrumenten voor het sorteren van cellen wordt uitgevoerd met een hoge specificiteit en hoge normen., De onderzoekers zoals gebruikend de cytometry methodes van de stroom omdat het de snelste en meest efficiënte manier is om meting op het volledige celproces toe te passen. De operator bepaalt of selecteert bepaalde parameters over hoe cellen moeten worden gesorteerd. i

Op dit punt legt de celsorteermachine een elektrische lading op aan elke cel, zodat cellen worden gesorteerd op lading (met behulp van elektromagneten) in aparte vaten bij het verlaten van de stroomkamer. De technologie om een heterogeen mengsel van cellen in verschillende populaties fysiek te sorteren is nuttig voor vele therapeutische en klinische toepassingen.,

inzicht in de relatie tussen FACS en Flow Cytometrie

om het de relatie tussen FACS analyse en flow cytometrie in eenvoudige context te zetten, zijn ze in principe partners in het celanalyseproces. FACS wordt gebruikt als cel sorter en verrijkt voor een subset van cellen die vaak dan in verder detail wordt bestudeerd gebruikend cytometry stroom of andere analytische techniques2. de Cytometrie van

stroom wordt gebruikt voor celanalyse en is gericht op het meten van eiwitexpressie of co-expressie binnen een gemengde populatie van cellen., Zowel Cytometry stroom als FACS worden ontwikkeld om cellen volgens hun optische filters te onderscheiden.

het belangrijkste onderscheid tussen de twee celkarakterisatiemodaliteiten ligt in de functionaliteit van de gebruikte methode.

zowel Cytometrie stroom als FACS hebben de neiging om door elkaar te worden gebruikt. Zij worden beide ontwikkeld om cellen volgens hun optische eigenschappen te onderscheiden. Er zijn echter enkele verschillen in methodologie die verschillend zijn en verschillende procedurele resultaten hebben., Enkel gebruikt zijn de resultaten unilateraal, en samen gebruikt, zijn de resultaten uitdrukkingsgegevens van veelvoudige celparameters3.

–FACS is een proces waarbij een monstermengsel van cellen wordt gesorteerd op basis van hun lichtverstrooiing en fluorescentiekenmerken in twee of meer containers. de cytometrie van

–stroom is een methodologie die tijdens analyse van een heterogene bevolking van cellen volgens verschillende molecules, grootte en volume van de celoppervlakte wordt gebruikt die het onderzoek van individuele cellen toestaat.,

-FACS samen met stroom cytometrie kan meerdere celgeneraties meten en karakteriseren door hoogst specifieke antilichamen te gebruiken die met fluorescente kleurstoffen worden geëtiketteerd, kan een onderzoeker FACS-analyse uitvoeren en tegelijkertijd expressiegegevens verzamelen en celsteekproeven sorteren door een aantal variabelen.

hoe Flow Cytometrie en FACS worden gebruikt in klinische toepassingen

immunofenotypering: een van de meest gebruikte toepassingsformaten is immunofenotypering. Dit is een methodologie die veelvoudige populaties van cellen in één heterogene steekproef identificeert en kwantificeert., Dit omvat perifeer bloed, beenmerg, en lymfe materiaal. Immunophenotyping wordt hoofdzakelijk gebruikt in hematologische montages om bepaalde kanker te diagnosticeren d.w.z. maligne lymfoom en/of leukemia4.

Celsortering: de vooruitgang in celsorteerders is gericht op het voorzichtig isoleren van cellen in afzonderlijke buizen. Gespecialiseerde stroommeters met de capaciteit om elke cel te ondervragen en te karakteriseren aangezien het door de laser gaat en cruciale meetgegevens van de cel uitdrukt., De sleutel hier wordt ook in kwantitatieve zin gemeten – de instrumentatie is in staat om grote volumes te verwerken die microscopisch onderzoek overbodig maken.

Celcyclusanalyse: met flowcytometrie en FACS kan de cel worden geanalyseerd en gemeten in alle vier verschillende fasen van de volledige celcyclus. De op cellen gebaseerde analyses kunnen dan met de bepaling van celanomalieën helpen gebruikend bepaalde fluorescente kleurstoffen. Het gebied van eencellige genomica gebruikt beide methoden om een eencellig type voor een celpopulatie te bestuderen.,

apoptose: apoptose, of geprogrammeerde celdood, is een normaal onderdeel van de levenscyclus van eukaryotische cellen. Cellen sterven om verschillende redenen: door necrose, veroorzaakt door externe fysische en chemische veranderingen in de cel of door apoptosis, een proces waarbij cellen een “zelfmoord” programma initiëren door intern gecontroleerde factoren. Deze twee verschillende types van celdood, apoptosis en necrose, kunnen via stroom cytometrische methodologie worden geà dentificeerd en worden gebruikt om morfologische, biochemische en moleculaire veranderingen te bepalen die in stervende cellen voorkomen.,

celproliferatie Assays: op cellen gebaseerde assays zijn een van de belangrijkste instrumenten om het werkingsmechanisme van reacties op bepaalde stimuli zoals groeifactoren, cytokines en andere mediacomponenten te meten. De stroomcytometer kan proliferatie meten door rustcellen met een fluorescente kleurstof van het celmembraan, carboxyfluoresceïne succinimidylester (CFSE) te etiketteren. Wanneer de cellen worden geactiveerd, beginnen zij zich te verspreiden en mitose te ondergaan. Aangezien de cellen delen, wordt de helft van de originele kleurstof doorgegeven aan elke dochtercel., Door de vermindering van het fluorescentiesignaal te meten, kunnen de onderzoekers cellulaire activering en proliferatie berekenen.

intracellulaire Calciumflux: cellen interageren zich binnen hun omgeving via signaaltransductieroutes. Wanneer deze routes worden geactiveerd, pompen membraangebonden calciumionkanalen calcium in de cel en verhogen snel de intracellulaire calciumconcentratie. De hogere calciumniveaus voorzien de cel van energie om te reageren. De stroomcytometer kan de stroom van calcium in de cel ontdekken en gedetailleerde meetgegevens 5 verstrekken.,

inpakken

De uitbreiding van flow-cytometrische technieken om intracellulaire kenmerken te evalueren verplaatst dit platform naar de arena van het bepalen van de celfunctie. Deze nieuwere benaderingen breiden cytometry het nut van stroom uit als waardevol hulpmiddel voor een dieper begrip van immune functie en de rol van bepaalde cellen aangezien het indicatoren van apoptosis begint te onthullen., Door Call levensvatbaarheid door verbeterde technologie te verbeteren en celdood of apoptosis te erkennen, dient de technologie om onderzoekers te helpen begrijpen waarom het en de biochemische veranderingen gebeurt die specifiek voor elke fase van celactiviteit voorkomen. Het in kaart brengen van de signaalwegen en de fragmentatie van DNA is een techniek die moleculaire genetici zeer waardevol vinden. de op mRNA gebaseerde therapeutische oplossingen schijnen om sleutel in het oplossen van sommige raadsels verbonden aan systemische ziekte6 te zijn.,

naarmate we dichter komen bij de mogelijkheid om het celanalyseproces te exploiteren via 3D-technologie, is het gemakkelijk om te zien hoe de opgedane kennis zal leiden tot meer innovatie. De onderzoeksgemeenschap kijkt ernaar uit om de deken van de moleculaire wetenschap uit te breiden tot stamceltechnologie. Met stamcellen en de mogelijkheid om ze effectief te klonen en ze aan het lichaam te introduceren om systeemverandering te creëren is waar de toekomst naartoe gaat., Wij kunnen zien hoe cytometry stroom en de verschillende methodologie van FACS uiteindelijk in positievere geduldige resultaten, therapeutische interventies, en misschien één – dag volledige lysis van kankergezwel tumors zal resulteren. Genetische ziekten worden snel ontdekt en de vertoning van vele nieuwe ontdekkingen heeft een nieuwe beweging van biologische en moleculaire wetenschap7 op gang gebracht.

bronnen:

2 2https: / / www.sciencedirect.,com/science/article/abs/pii/0022175981902532

3 https://sciencing.com/understand-flow-cytometry-results-5805206.html

4 https://www.cancer.gov/publications/dictionaries/cancer-terms/def/immunophenotyping

5 https://journals.sagepub.com/doi/abs/10.1177/1087057104264038

6 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4623474/

7 https://www.nature.com/scitable/topicpage/cdk-14046166/