flowcytometri vs Facs (Norsk)

flowcytometri vs. FACS: Hva er Forskjellen?

flowcytometri og FACS (fluorescens aktivert celle-sortering) er utpreget forskjellige prosedyrer om FACS er en etterkommer prosedyre basert på flowcytometri-protokoller. Fremskritt i celle-sortering-teknologi bidrar i en stor måte å molekylære vitenskap landskapet., Den samlede bidrag av hva som er lært er hva leder farmasøytisk discovery prosessen i både en diagnostisk kapasitet og også terapeutisk foretak som i sin tur fører til bedre pasienten outcomes1.

Hva er flowcytometri?

flowcytometri er en metode som brukes til å undersøke og finne ut uttrykket av intracellulære molekyler og celleoverflaten og til å definere og karakterisere enkelt forskjellige celletyper. Det er også brukt for å bestemme celle volum, celle størrelse og evaluering renhet på undergrupper av befolkningen som er isolert., Dette muliggjør multi-parameteren evaluering av individuelle celler på omtrent samme tid.

En flowcytometri er et kraftig instrument, fordi den gir samtidig analyse av både fysiske og kjemiske egenskaper av tusenvis av partikler per sekund. Dette gjør det til en rask og kvantitativ metode for analyse og rensing i cellesuspensjon. Ved hjelp av flow, kan vi finne ut phenotype og funksjon, og selv sortere levende celler., jeg

Noen av måling-programmer som er tatt via flowcytometri inkluderer:

• Platederivert funksjon
• Bein marg
• Perifert blod

De to potensielle flowcytometri data uttrykk formater inkluderer:

• histogrammer som kan måle eller sammenligne kun en enkelt parameter
• dot-plott som sammenligner 2 eller 3 parametre samtidig på en to – eller tre-dimensjonale scatter-plot.

Hva er FACS?,

FACS er en forkortelse for fluorescens-aktivert enkelt celle, sortering, som er en flowcytometri teknikk som videre legger en grad av funksjonalitet. Ved å benytte svært spesifikke antistoffer merket med fluorescerende konjugater (en fluorescerende molekyl kalt fluorkrom), FACS analyse tillater oss samtidig å samle inn data på, og sortere en biologisk prøve av et nesten ubegrenset antall av forskjellige parametre. Akkurat som i vanlig flowcytometri, frem-scatter -, side-scatter, og fluorescerende signal data er samlet inn.,jeg

ved Hjelp av en flowcytometeret maskin, cellene eller andre partikler suspendert i en væske strøm sendes gjennom en laserstråle i én fil mote, og interaksjon med laserlys er målt ved en elektronisk lys detektor apparater som lysspredning og fluorescens intensitet. Hvis en fluorescerende markør er bundet til en mobil komponent, fluorescens intensitet vil ideelt sett representere mengden av en bestemt flyt celle komponent.

Celle-sortering via avansert celle-sortering instrumentering er utført med høy spesifisitet og høye standarder., Forskere som ved hjelp av flowcytometri metoder fordi det er den raskeste og mest effektive måten å bruke målingen til hele cellen prosessen. Operatøren forhåndsdefinerer eller velger visse parametere på hvordan cellene skal være sortert. jeg

På dette punktet, celle-sortering maskinen pålegger en elektrisk ladning på hver celle, slik at cellene vil være sortert etter kostnad (ved hjelp av electromagnets) i separate kar ved avslutning flyten kammeret. Teknologien for å fysisk form en heterogen blanding av celler i ulike populasjoner er nyttig for mange terapeutiske og kliniske anvendelser.,

Forstå Forholdet Mellom FACS og flowcytometri

for Å sette det på forholdet mellom FACS analyse og flowcytometri enkel sammenheng, de er i utgangspunktet partnere i cellen analyse prosessen. FACS er brukt som en celle sorter og beriket for en undergruppe av celler som er ofte så studert i mer detalj ved hjelp av flowcytometri eller andre analytiske techniques2.

flowcytometri er brukt for celle analyse og er fokusert på å måle protein uttrykk eller co-uttrykk i en blandet befolkning av celler., Både flowcytometri og FACS er utviklet for å skille mellom celler i henhold til deres optiske filtre.

Det viktige skillet mellom de to cell karakterisering modaliteter ligger i funksjonaliteten av metoden blir utnyttet.

Begge flowcytometri og FACS har en tendens til å bli brukt om hverandre. De er begge utviklet for å skille mellom celler i henhold til deres optiske egenskaper. Det er imidlertid noen forskjeller i metodikk som er forskjellig og har ulike prosessuelle utfall., Brukt helt resultatene er ensidig, og brukes sammen, resultatene er uttrykk data fra flere celle parameters3.

–FACS er en prosess som et eksempel på blanding av celler som er ordnet i henhold til deres lys spredning og fluorescens egenskaper inn i to eller flere containere.

–flowcytometri er en metodikk som er benyttet i analyse av en heterogen befolkning av celler i henhold til ulike celleoverflaten molekyler, på størrelse og volum, noe som gjør etterforskningen av individuelle celler.,

-FACS sammen med flowcytometri kan måle og karakterisere flere celle generasjoner ved å bruke svært spesifikke antistoffer merket med fluorescerende fargestoffer, en forsker kan utføre FACS analyse og samtidig samle uttrykk data og sortere celle-prøver av en rekke variabler.

Hvordan flowcytometri og FACS Er Brukt i den Kliniske Applikasjoner

Immunfenotyping: En av de mest vanlige program formater som brukes er immunfenotyping. Dette er en metodikk som identifiserer og kvantifiserer flere bestander av celler i en heterogen eksempel., Dette inkluderer perifert blod, beinmarg og lymfe materiale. Immunfenotyping er først og fremst brukt i hematological innstillinger for å diagnostisere visse kreftformer vil si ondartet lymfom og/eller leukemia4.

Celle-Sortering: Fremskritt i celle sorters er rettet mot den milde isolering av celler inn i separate rør. Spesialisert flow meter med evne til å kartlegge og karakterisere hver celle når den passerer gjennom laser og uttrykke avgjørende for måling av data i cellen., Nøkkelen her er også målt i en kvantitativ forstand – instrumentering er i stand til å håndtere store volumer som gjør mikroskopisk undersøkelse foreldet.

Cell Cycle Analysis: Med flowcytometri og FACS, cellen kan bli analysert og målt i alle fire forskjellige faser av hele celle syklus. Celle-baserte analyser kan da hjelpe til med fastsettelse av cellen anomalier ved hjelp av visse fluorescerende fargestoffer. Feltet enkelt celle genomics benytter begge disse metodene for å studere en enkelt celle-type for en celle befolkningen.,

Apoptosis: Apoptosis, eller programmert celledød, er en normal del av livssyklusen til eukaryote celler. Cellene dør for en rekke grunner: gjennom nekrose, brakt videre av ytre fysiske og kjemiske endringer i cellen eller gjennom apoptosis, en prosess som celler starte et «selvmord» program gjennom internt kontrollert faktorer. Disse to ulike typer av celledød, apoptosis og nekrose, kan identifiseres via flowcytometrisk metode og brukes til å avgjøre morfologiske, biokjemiske og molekylære endringer som skjer i døende celler.,

Cell Spredning Analyser: Celle-baserte analysene er en av de viktigste verktøyene for å måle virkningsmekanisme svar på visse stimuli som vekstfaktorer, cytokiner og andre medier komponenter. Den flowcytometeret kan måle spredning av merking hvilende celler med en celle membran fluorescerende fargestoff, carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE). Når cellene er aktivert, de begynner å spre seg, og gjennomgå mitose. Som cellene deler, halvparten av den opprinnelige fargen er gått på hver datter celle., Ved å måle reduksjonen av fluorescens-signal, forskere kan beregne cellulær aktivering og spredning.

Intracellulære Kalsium Flux: Celler samhandle blande i sine omgivelser gjennom signal transduksjon trasé. Når disse veier er aktivert, membran-bundet kalsium ion-tv pumpe kalsium inn i cellen og raskt å øke den intracellulære kalsium konsentrasjon. Den høyere kalsium nivåer gir cellen med energi til å svare. Den flowcytometeret er i stand til å oppdage endring av kalsium inn i cellen og gir detaljert måling data5.,

Innpakning Opp

utvidelsen av flyt-cytometrisk teknikker for å evaluere intracellulære egenskaper er å flytte denne plattformen i den arena for å bestemme celle funksjon. Disse nyere tilnærminger er å utvide bruk av flowcytometri som et verdifullt verktøy for å få en dypere forståelse av immunsystemet funksjon og rolle av visse celler som det begynner å åpenbare indikatorer på apoptosis., Ved å forbedre samtale levedyktighet gjennom forbedret teknologi og gjenkjenne celledød eller apoptosis, teknologien tjener til å hjelpe forskere med å forstå hvorfor det skjer, og de biokjemiske endringene som skjer som er spesifikke for hver fase av celle aktivitet. Kartlegging signal trasé og DNA-fragmentering er en teknikk som molecular genetikere er å finne svært verdifull. mRNA basert terapeutiske løsninger synes å være nøkkelen til å løse noen av gåtene som er forbundet med systemisk disease6.,

når vi beveger oss nærmere å være i stand til å utnytte cellen analytiske prosessen via 3D-teknologi er det lett å se hvordan den kunnskapen som er ervervet vil føre til økt innovasjon. Forskningsmiljøet ser frem til å strekke teppe av molekylære vitenskap å inkludere stem cell technology. Med stamceller og muligheten til å klone dem effektivt og introdusere dem til kroppen for å skape system endringen er der fremtiden kommer., Vi kan se hvordan flowcytometri og annen metodikk av FACS vil til slutt resultere i mer positive resultatene pasienten, terapeutiske intervensjoner, og kanskje en dag fullføre lyse av ondartede svulster. Genetisk sykdom er raskt blir avdekket og visning av mange andre nye funn har startet en ny bevegelse av biologiske og molekylære science7.

Kilder:

2 2https://www.sciencedirect.,com/science/article/abs/pii/0022175981902532

3 https://sciencing.com/understand-flow-cytometry-results-5805206.html

4 https://www.cancer.gov/publications/dictionaries/cancer-terms/def/immunophenotyping

5 https://journals.sagepub.com/doi/abs/10.1177/1087057104264038

6 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4623474/

7 https://www.nature.com/scitable/topicpage/cdk-14046166/