Il laboratorio microbiologico NIOMs è approvato come laboratorio di classe 2 dal Ministero della Salute norvegese ed è approvato per il lavoro con GMM (microrganismi geneticamente modificati) contenuti. Il laboratorio è dotato di strutture per il test antibatterico e la crescita del biofilm sulle superfici dei materiali.
Biofilm
Il biofilm viene coltivato su biomateriale in pozzi di microtitolazione o in un reattore di biofilm. I composti antibatterici possono essere incorporati o rivestiti sulla superficie del biomateriale., Diverse tecniche sono utilizzate per studiare il loro effetto sulla formazione e sulla crescita del biofilm. La quantità di biofilm può essere quantificata dopo la colorazione di safranina e anche essere visualizzata mediante microscopia elettronica. La vitalità del biofilm può essere determinata mediante colorazione viva / morta e microscopia a fluorescenza / confocale, saggio di resazurina, saggio XTT o contando la vitalità dopo aver staccato il biofilm seguito da placcatura su piastre di agar nutritivo.
Il metodo dell’unità di formazione delle colonie (CFU) può essere utilizzato per l’identificazione di microrganismi e per testare l’effetto di sostanze e tecniche antimicrobiche., È un metodo sensibile e ampiamente accettato all’interno della microbiologia. In questo metodo, il numero di cellule viventi (cellule in grado di riprodursi) presenti in una sospensione viene contato su una superficie di agar nutriente.
Le cellule batteriche vengono raccolte e disperse in una soluzione non tossica come la soluzione salina tamponata con fosfato o l’acqua fisiologica. La sospensione cellulare viene quindi diluita, normalmente in serie con una diluizione di 10 volte, al fine di ottenere piastre con un numero numerabile di batteri., Una certa quantità di ogni diluizione viene placcata, in repliche di 3 o 4, su piastre di petri con agar nutritivo destinato ai batteri in questione. Le piastre di petri sono incubate in ambienti adatti e per un tempo appropriato prima che le colonie siano contate. Ogni colonia che può essere contata è chiamata unità di formazione di colonie (CFU) e il numero di CFU è correlato al numero vitale di batteri nel campione. Il numero di batteri nel campione originale viene calcolato matematicamente, tenendo conto della quantità placcata e del suo fattore di diluizione., I risultati sono spesso presentati come CFU / ml (unità formanti colonie per millilitro) per i liquidi e CFU/g (unità formanti colonie per grammo) per i solidi.
Tecnica di placcatura a spirale
Il metodo tradizionale con diluizione e placcatura richiede molto tempo e quindi il numero di variabili in un test può essere limitato. Il laboratorio di microbiologia di NIOM utilizza quindi una tecnica di placcatura a spirale in cui uno strumento, il WASP spiral plater (Figura 1), deposita un determinato volume di campione su una piastra di agar rotante.,
Il volume del campione depositato per unità di superficie della piastra diminuisce attraverso la spirale con conseguente effetto di diluizione e consentendo il conteggio delle colonie isolate (Figura 2) nei rispettivi settori di volume di deposizione noto.
Per il conteggio dei batteri, NIOM utilizza un contatore automatico di colonie, accolito, e i risultati vengono trasferiti direttamente a Excel per ulteriori analisi.