i prodotti in Sperimentazione
Lo studio prodotto UC-II® (Lotto 1204004) è stato derivato dal pollo sterno., È stato prodotto nelle attuali condizioni di buona pratica di fabbricazione (cGMP) utilizzando un processo brevettato che ha conservato la sua struttura nativa (Chick Cart Inc., Fort Smith, AR). Sia glucosamina cloridrato (GH) e condroitin solfato (CS) sono stati acquistati attraverso Wilke Resources (Lenexa, KS). Il gruppo Wellable (città di Shishi, Fujian) ha prodotto GH sotto cGMP e secondo le specifiche della Farmacopea degli Stati Uniti 26. Sioux Pharm (Centro di Sioux, IA) prodotto bovino derivato CS sotto cGMP., UC-II e GC sono stati incapsulati in capsule opache di dimensioni “00” con quantità sufficienti di eccipienti (cellulosa microcristallina e biossido di silicio) tali da essere sensoriali identiche al placebo. InterHealth Nutraceuticals ha fornito tutti i materiali di studio. All American Pharmaceutical (Billings, MT) ha verificato la quantità di principi attivi nelle capsule dello studio. I materiali di studio sono stati conservati in un armadio sicuro con accesso limitato al coordinatore del sito, al farmacista dispensatore e allo sperimentatore principale.,
Progettazione dello studio
L’obiettivo di questo studio clinico randomizzato, in doppio cieco, controllato con placebo, era di valutare la capacità di UC-II di migliorare i sintomi del ginocchio nei soggetti OA, come misurato dal punteggio complessivo WOMAC, rispetto al placebo e al GC. Il processo è stato condotto in 13 centri nel sud dell’India. A causa di una limitazione nelle procedure di campionamento del liquido sinoviale in più siti clinici, lo studio è stato condotto nell’ambito di due protocolli di studio separati., I protocolli di studio sono stati approvati dal Comitato etico istituzionale (IEC) di ciascun centro ed elencati nel registro degli studi clinici dell’India come protocolli di studio 003663 e 003348. L’iscrizione, la randomizzazione e le visite di follow-up erano identiche per entrambi i protocolli e sono state eseguite al giorno 1 (basale), 7, 30, 60, 90, 120, 150 e 180 (Tabella 1). Tutti gli investigatori hanno partecipato alle stesse riunioni degli sperimentatori, hanno utilizzato moduli identici di assunzione e segnalazione dei dati e sono stati addestrati e monitorati dallo stesso gruppo di associati di ricerca clinica.,
Le misure di efficacia sono state valutate in tutte le visite e hanno incluso gli indici WOMAC, VAS e LFI. Il test della gamma di movimento della flessione del ginocchio (ROM) è stato eseguito ad ogni visita. I diari per soggetto e il prodotto di studio sono stati forniti in tutte le visite, tranne il giorno 180 e sono stati raccolti in tutte le visite di follow-up., I soggetti sono stati istruiti a registrare quotidianamente il consumo del prodotto in studio, l’uso di farmaci di salvataggio e farmaci concomitanti nel caseificio soggetto per l’intera durata dello studio. Sangue e urina sono stati raccolti allo screening e al giorno 180. Il test di gravidanza è stato effettuato durante lo screening e le visite di follow-up. Gli eventi avversi (AEs) sono stati registrati utilizzando gli input del diario di ciascun soggetto più i questionari di visita in loco somministrati dal personale di assunzione in tutte le visite di studio.,
Endpoint clinici
L’endpoint primario è stato definito come la variazione del punteggio WOMAC totale dal basale al giorno 180 per il gruppo UC-II rispetto al placebo e al GC. Gli endpoint clinici secondari per entrambi i protocolli erano simili e includevano la variazione dal basale al giorno 180 rispetto al placebo e GC per tutti gli endpoint inclusi i seguenti punteggi: (1) VAS medio; (2) sottoscale WOMAC medio; (3) LFI; e (4) flessione del ginocchio. Un altro endpoint ha incluso la variazione dal basale al giorno 180 per il biomarcatore sierico cartilage oligomeric matrix protein (COMP)., Nel protocollo 003348, ulteriori endpoint secondari includevano la variazione del biomarcatore sierico, della proteina C-reattiva (CRP) più dei biomarcatori del liquido sinoviale interleuchina (IL)-6 e della metalloproteinasi della matrice (MMP)-3 dal basale al giorno 180.
Soggetti dello studio
Sono stati sottoposti a screening un totale di 234 soggetti e 191 randomizzati (Fig. 1). I criteri di inclusione dello studio erano soggetti di età compresa tra 40 e 75 anni di sesso maschile e femminile, un indice di massa corporea (BMI) di 18-30 kg/m2, OA da moderato a grave mediante esame fisico (crepitio, ingrossamenti ossei, gonfiore articolare, ecc.,) in una o entrambe le ginocchia, dolore al ginocchio per almeno 3 mesi prima dell’inizio dello studio, un punteggio LFI tra 6 e 10 e un punteggio VAS di 40-70 mm 7 giorni dopo il ritiro dai farmaci esclusi, più una radiografia del ginocchio che è stata classificata come punteggio di radiografia di Kellgren e Lawrence (K-L) di 2 o 3 . Tutte le diagnosi di OA sono state confermate da ciascun investigatore del sito di studio e annotate nel case report form (CRF) del soggetto. Nel caso di coinvolgimento bilaterale del ginocchio, il ginocchio indice utilizzato per lo studio era quello che presentava i sintomi di OA più gravi al basale., I criteri dettagliati di inclusione-esclusione sono riassunti nella tabella 2.
l’Iscrizione e la randomizzazione diagramma di flusso
l’Etica, il consenso e permessi
i Soggetti sono stati reclutati dopo l’hanno esaminato, compreso lo studio dei dettagli, e poi ha firmato la IEC-approvato il modulo per il consenso., Lo studio è conforme alla Dichiarazione di Helsinki (versione 1996).
Randomizzazione&accecamento
La randomizzazione a blocchi, composta da nove individui per blocco, è stata eseguita in un rapporto 1:1:1 utilizzando numeri casuali generati da uno statistico indipendente (SPSS versione 16.0). La conoscenza del codice di randomizzazione era limitata allo statistico più un monitor QA non correlato allo studio., Ad ogni investigatore sono state somministrate buste opache e sigillate che indicavano i numeri di identità del singolo paziente, i codici di randomizzazione e il regime di integrazione da aprire in caso di emergenza. Il codice è stato rotto dopo che il database clinico è stato bloccato.
Regime di dosaggio
I soggetti hanno ingerito due pillole blu al mattino con colazione e due capsule bianche prima di coricarsi. Per la coorte UC-II, le due capsule mattutine erano placebo, mentre le capsule serali contenevano 20 mg ciascuna di UC-II per un totale di 40 mg, che è identico ai livelli di dose clinica precedentemente utilizzati . Questa dose erogata 1.,2 mg di collagene di tipo II non denaturato determinato da un protocollo ELISA di estrazione di nuova concezione e validato (AIBiotech, Richmond, VA & Chondrex, Redmond, WA). Per il gruppo GC, le dosi mattutine e serali hanno consegnato 750 mg di GH più 600 mg di CS ciascuna per un totale di una dose giornaliera di 1.500 mg di GH più 1.200 mg di CS. Il gruppo placebo ha ingerito un numero identico di capsule blu e bianche contenenti solo eccipienti. Le bottiglie di studio sono state etichettate secondo ICH-GCP e le linee guida normative locali applicabili.,
Terapie precedenti e concomitanti
Alla visita di screening da parte dello sperimentatore dello studio sono stati documentati farmaci precedenti. Ad ogni visita, il personale dello studio ha esaminato i diari dei soggetti e ha interrogato ciascun partecipante sull’uso di eventuali farmaci concomitanti, inclusi quelli nell’elenco proibito. I farmaci proibiti includevano iprofene, aspirina, altri FANS o altri antidolorifici (OTC o prescrizione), oltre a qualsiasi integratore alimentare (escluse le vitamine) che potesse supportare la salute delle articolazioni., Tutti i farmaci concomitanti utilizzati durante lo studio sono stati documentati nella cartella clinica del soggetto dallo sperimentatore dello studio, poi trascritti nel loro CRF dal personale dello studio.
Farmaci di salvataggio
Il paracetamolo è stato consentito alla dose di 500 mg due volte al giorno. I partecipanti sono stati istruiti a non assumere questo farmaco entro 48 ore da una visita di valutazione. I livelli di utilizzo e la tempistica sono stati inseriti ad ogni visita nella cartella clinica del soggetto dallo sperimentatore dello studio. Il personale dello studio ha trascritto queste informazioni nel CRF del soggetto.,
Conformità e sicurezza
I soggetti sono stati istruiti a portare le loro bottiglie ad ogni visita. Le capsule rimanenti sono state contate e registrate nel registro CRF e accountability del soggetto. Come misura secondaria di conformità, i soggetti hanno completato un diario che indica il dosaggio giornaliero dei prodotti in studio. Le valutazioni di sicurezza sono state effettuate a tutte le visite dello sperimentatore e del personale del sito (vedere Tabella 9).
Le valutazioni dello studio
i punteggi WOMAC sono stati determinati utilizzando il WOMAC VA3.,1 questionario contenente 24 elementi raggruppati in tre categorie: dolore, rigidità e funzione fisica (intervallo di punteggio 0-2400). Ogni rispettivo punteggio medio sottoscala WOMAC è stato determinato dividendo il punteggio sottoscala per il numero di domande (5, dolore; 2, rigidità; 17, funzione fisica) che conteneva. Il punteggio VAS medio è stato determinato utilizzando un questionario VAS contenente 7 domande relative al dolore (intervallo di punteggio 0-700), e quindi dividendo il punteggio complessivo per sette., Il punteggio LFI è stato determinato utilizzando un questionario LFI che ha valutato il dolore, la distanza a piedi e le attività della vita quotidiana (intervallo di punteggio 0-24). La flessione del ginocchio è stata misurata utilizzando la goniometria con il soggetto sdraiato in posizione prona e la gamba da testare posizionata lungo il bordo del tavolo .
Biomarcatori del liquido sinoviale
Il liquido sinoviale (~0,5 mL) è stato aspirato dall’articolazione del ginocchio utilizzando un ago di dimensioni appropriate (calibro 18-24, a seconda delle dimensioni dell’articolazione). Il liquido raccolto è stato conservato congelato fino al test., I livelli di IL-6 e MMP-3 sono stati determinati utilizzando i corrispondenti kit ELISA Duoset (R&D Systems, Minneapolis, MN).
Biomarcatori sierici
I livelli di COMP (Quantikine ELISA, R&Sistemi D) sono stati determinati in entrambi i protocolli di studio. I livelli di CRP (Latex COBAS INTEGRA, Roche Diagnostics GmbH, Mannheim) sono stati valutati nel protocollo 003348. Il siero è stato conservato congelato fino all’analisi. I coefficienti di variazione interassay e intrassay per COMP e CRP erano < 5 %.,
Statistiche
Abbiamo verificato, utilizzando l’analisi a 2 vie della varianza (ANOVA), che i risultati dei due protocolli potevano essere combinati in un’unica analisi dimostrando che non c’era interazione di gruppo per studio e che l’entità dell’efficacia osservata sotto i due protocolli era simile.
È stata utilizzata un’analisi modificata intent-to-treat (mITT) per valutare i risultati di efficacia e sicurezza definiti a priori. Ciò ha incluso tutti i soggetti che sono stati randomizzati, hanno consumato il prodotto dello studio e hanno avuto almeno una visita post-basale completata., Un’analisi della covarianza (ANCOVA), che includeva la supplementazione come fattore fisso e il corrispondente valore di base della variabile testata come covariata, è stata utilizzata per valutare la significatività statistica complessiva degli endpoint primari e secondari. Dopo ANCOVA, il test di confronto multiplo Tukey-Kramer è stato utilizzato per determinare la significatività statistica a coppie e calcolare gli intervalli di confidenza del 95%. Inoltre, è stata eseguita un’analisi mixed model Repeated measures (MMRM) dell’endpoint primario per tenere conto delle molteplici valutazioni ottenute durante questo studio., Inoltre, il metodo dei trapezi è stato utilizzato per calcolare l’area incrementale sotto la curva (iAUC) per tutti i gruppi di studio. Per la stima iAUC, i valori mancanti sono stati imputati utilizzando l’algoritmo di massimizzazione delle aspettative in SAS. L’uso di farmaci di salvataggio tra i gruppi è stato confrontato utilizzando la regressione logistica seguita da confronti a coppie utilizzando il test Tukey-Kramer. Inoltre, è stata eseguita un’analisi stratificata dell’endpoint primario in base ai livelli sierici di COMP al basale superiori e inferiori al valore mediano per questo biomarcatore., Le differenze sono state considerate significative se il valore p risultante era ≤0,05. Uno statistico indipendente ha eseguito le analisi e altri calcoli utilizzando SAS versione 9.3 (Cary, NC).