Határok Állatorvos-Tudomány

Bevezető

Gerinctelenek közé tartozik, körülbelül egy millió állatfaj tartotta mind zoológiai intézmények, mind a háztartások, ahol kézzel nevelt, egzotikus háziállat (1). A haslábúak közel 60 000 vízi és szárazföldi puhatestű-fajt, elsősorban csigákat és csigákat (1) tartalmaznak. Az Óriás afrikai szárazföldi csiga (Achatina fulica, syn., Lissachatina fulica) Kelet-Afrikában őshonos, de Ázsiában, Óceániában és újabban Amerikában elterjedt invazív faj, ahol véletlenül vagy szándékosan, táplálékforrásként és háziállatként vezették be. Természetes ökoszisztémákban, mezőgazdasági és városi területeken való megjelenése ökológiai, egészségügyi és mezőgazdasági veszélyeket eredményezett (2, 3). Az Óriás afrikai szárazföldi csiga több parazita köztes gazdája, köztük az Aelurostrongylus abstrususus, Angiostrongylus cantonensis, Angiostrongylus costaricensis, Schistosoma mansoni, Hymenolepis spp.,, és Fasciola hepatica (4, 5). A fenti bélférgek, az A. abstrusus kivételével, súlyos betegségeket okozhatnak az emberekben. Pontosabban, az Óriás afrikai szárazföldi csiga az A. cantonensis világméretű elterjedéséért felelős fő gastropod, amely emberi eozinofil meningoencephalitist okoz Ázsiában és Amerikában (2, 6). Az emberek, háziállatok és vadon élő állatok ezen bélféreg parazitákkal való fertőzésének kockázati tényezői közé tartozik a nyers vagy nem főtt fertőzött csigák vagy csigák lenyelése, vagy a fertőzött csigák vagy csigák iszapjával szennyezett élelmiszerek(4, 5, 7, 8).,

Bár az Afrikai óriás szárazföldi csigák között a legnépszerűbb csigát tartott háziállatok, illetve a világszerte népszerű, mint egzotikus háziállatok gyorsan növekszik, csak néhány felmérések az előfordulása a paraziták természetes körülmények között (2, 6, 9-11). A felmérés célja az volt, hogy megvizsgálja a paraziták előfordulását a Dél-Olaszországban háziállatként tenyésztett óriás afrikai szárazföldi csigákban.,

Anyagok, Módszerek

Általános Adatok

augusztus 2018-ig, három medence friss széklet mintát kapott, összesen 60 óriás Afrikai szárazföldi csigák, tartotta a három különböző magángyűjteményekben található Pozzuoli, Caserta, s Nápoly (Olaszország), vizsgálták a paraziták. Minden településről 20 különálló csigából nyertünk egy ürülék medencét. A felmérésben szereplő csigák medián életkora 1,6 év volt, 0,2-2 év, és nem kaptak korábbi parazitaellenes kezelést., A csigákat friss zöldségekkel és gyümölcsökkel táplálták, továbbá kalciumpor-pótlást (kalcium, Exo Terra, Hagen Deutschland GmbH & Co. KG, Holm, Németország) biztosították hetente kétszer. Minden állatot Olaszországban tenyésztettek, magántulajdonban voltak és háziállatként tartottak négy, 60 × 30 × 45 cm méretű beltéri terráriumban, 10-20 állatcsoportokban (2 csoport 20 csigából Pozzuoliban és Caserta-ban, valamint 2 csoport 10 csigából Nápolyban)., Szubsztrátumként egy korábban hőkezelt (100°C-on 30 percig), majd parazitáktól és rovaroktól mentes szerves tőzegtalajt (szerves kókusz-tőzeg talaj, E-Coco termékek, Gloucestershire, Egyesült Királyság) használtunk.

diagnosztikai eljárások

a négy terrárium mindegyikéből kezdetben húsz gramm friss ürüléket kaptak., Amikor összesített széklet által elemzett friss kenet, lebegő, illetve Baermann vizsgálat azt mutatta, pozitivitás, hogy rhabditid fonálférgek, két csiga minden pozitív terrárium tartottak külön-külön, egy steril, műanyag doboz, a széklet gyűjtötték, azonnal székelés után, steril 50 ml-es műanyag cső. Az összevont és egyedi minták koprológiai vizsgálata magában foglalta a friss kenetet, a centrifugális flotációt (2 g széklet minden vizsgálathoz) cukor és formaldehid (fajsúly 1.27) és a Baermann-tesztet (10 g széklet minden vizsgálathoz)., Ezenkívül a friss kenetvizsgálat során kapott nyálkahártyát fénymikroszkóp alatt elemeztük. Mivel több helminth faj lárvaformája behatolhat a csigák lábizmába, a lábizom elülső és hátsó területeiről betakarított biopsziás minták szövettani vizsgálatát 30 csigában végezték el, amelyet Giannelli et al. (12.), illetve Gilbertson és Wyatt (13.)., A biopsziás mintákat 10%-ban semleges foszfát pufferelt formalinban rögzítették,és rutin módszerekkel paraffinblokkokká dolgozták fel, amelyeket 3 µm vastag szakaszokra vágtak, és hematoxilinnel és eozinnal festettek. A tanulmányt a gyakorlat engedélyével végezték, ahol megtörtént, aláírt, írásbeli tájékozott tulajdonos beleegyezésével.

morfológiai azonosítás

Az ideiglenes tartókat hőölő fonálférgek készítették üvegcsúszdákon egy csepp vízben, majd üvegfedél csúszkát alkalmaztak., A fonálférgeket egy csepp csapvízbe helyezték egy üvegcsúszdán, majd 10 másodpercig melegítőre (100°C) helyezték. ezeket a mintákat morfológiai azonosításra használták. Megfigyelésre egy AMPLIVAL fénymikroszkópot, Carl Zeiss Jena-t és egy Nomarski optikával rendelkező Leitz Diaplan-t használtak., Morfológiai azonosítása rhabditid fonálférgek követte Andrássy (14), valamint Andrássy (15) volt, leginkább a morfológia, a garat, illetve gázcserenyílás, valamint a reproduktív rendszer, elsősorban a funkciók spicules, száma, helyzete papillák, vagy jelenlétét, mérete vagy alakja nem bursa a férfiaknál; valamint a farok alakja, helyzete a szeméremtest, valamint morfológiája reproduktív rendszer a nőknél. A lárvák azonosítása a farok alakján alapult.

molekuláris analízis

a DNS-t a három lelőhelyről gyűjtött 96% – os etanolban rögzített ürülékből nyert fonálféregmintákból nyerték ki., A fonálférgeket a molekuláris analízis előtt egy éjszakán át kettős desztillált vízben (ddH2O) mossuk az etanol maradékainak teljes eltávolítására. Egyes paraziták át a steril Eppendorf cső (200 µl) 20 µl extrakciós pufferben (17.7 µl ddH2O, 2 µl 10 × koncentrált PCR puffer, azaz 0,2 µl 1% Tween 20, 0,1 µl proteináz K). Puffer, fonálférgek volt fagyasztva, -20°C-on 20 percig, majd azonnal inkubálják 65°C, 1 h, majd 10 percig 95°C., A lizátumokat jégen lehűtöttük, majd centrifugáltuk (2 perc, 9000 g); 1 µl felülúszót használtunk PCR-hez.

a belső átírt távtartó régiókat (ITS1, 5.8 S, ITS2) tartalmazó rDNS-fragmentumot 18S: 5′-TTG ATT ACG TCC CTG CCC TTT-3′ (előre) és 28S: 5′-TTT CAC TCG CCG tta CTA agg-3′ (fordított) (16) primerek segítségével erősítették meg. A 18S rRNA génjét tartalmazó rDNS-fragmentumot 22F: 5′- TCC AAG GAA GGC AG GC-3′ (előre) és 1080jr: 5′- TCC TGG TGGG TGC CCC TCC GTC AAT TTC-3′ (fordított) (17) primerek segítségével erősítették meg. A PCR master mix állt: ddH2O, 7.,25 µl; 10 × PCR puffer, 1,25 µl; dezoxinukleozid-trifoszfátok (dNTPs), 1 µl; 0,75 µl mind előre -, mind fordított primer; polimeráz, 0,1 µl; és 1 µl DNS-kivonat. A PCR profilok használtak a következők szerint: a 1 ciklus 94°C-on 7 perc követi, 35 ciklus 94°C-on 60 s, 50°C, 60 s, 72°C-60 s egy végső nyúlás 72°C-on 7 perc (14); a 18 1 ciklus 94°C-on 5 percig, majd 35 ciklus 94°C-on 60 s, 55°C-90 s, 72°C-on 2 percig, majd egy végső nyúlás 72°C-on 10 percig., A PCR termékeket a GATC Biotech (Németország) szekvenálta, majd később Szerkesztette és feltöltötte a Genbankra (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/).

eredmények

a Baermann-teszt kimutatta a fonálféreg lárvák jelenlétét, amelyek hossza 170-336 µm volt, minden mintában. A tojásokat, a lárvákat és a felnőtt rhabditid fonálférgeket friss kenet-és flotációs módszerekkel fedezték fel minden székletmintában. Rhabditella axei (1.ábra) morfológiailag a Pozzuoliból és Nápolyból származó három összevont és egyedi székletminta közül kettőt azonosítottak. Ezen kívül Rhabditis terricola, Cruznema sp.,, és a Pristionchus entomophagust izolálták egy medencéből és a Caserta egyes székletmintáiból. Az izom biopsziás mintákban vagy a nyálkahártyában nem észleltek parazitákat.

Több morfológiai típusú rhabditid fonálférgek különítve csiga széklet rögzített 96% – os etanol. Beszerzett szerkesztett sorozatok, valamint A 18 ezek a fonálférgek hasonlították össze (ROBBANÁS) az anyag a GenBank azonosított, mint R. axei (részleges 18, csatlakozási száma MK124578, hasonlóság, 99%), Rh., terricola (partial 18S and partial ITS1, csatlakozási szám MK156052, hasonlóság 100%), P. entomophagus (partial 18S and partial ITS1, csatlakozási szám MK156050, hasonlóság 99%) és Cruznema sp. (részleges 18S és részleges ITS1, MK156051 csatlakozási szám, hasonlóság 96-100%).

Vita

a vizsgálat eredményei azt mutatják, hogy az összes vizsgált óriás afrikai szárazföldi csigák tojásokat, lárvákat és felnőtt rhabditid fonálférgeket raknak a székletben, ezért más háziállatok és emberek fertőzési forrását jelenthetik. A Strongyloides sp-vel való téves azonosítás elkerülése érdekében.,, egy fonálféreg faj, amely szoros hasonlóságot mutat a rhabditidekkel, amelyek egyértelmű parazita zoonotikus jelentőséggel bírnak (14, 15, 18), a rhabditid fonálférgek kezdeti morfológiai diagnózisát molekuláris elemzésekkel igazolták.

a Rhabditidae közé tartoznak a szabadon élő szaprofita fonálférgek, amelyek széles körben megtalálhatók a talajban és a szerves törmelékben, ahol főként baktériumokkal táplálkoznak. Számos csigafaj szolgálhat a rhabditid fonálférgek végső végleges gazdaszervezeteként (14, 15). Azonban számos Rhabditis és Rhabditella fajt társítottak gerincesekkel, köztük emberekkel (14, 15, 19-27)., Bár jelenlétük a környezetszennyezés következménye lehet, ezek a fonálférgek számos állat és ember betegségét okozhatják. Rhabditis elongata, Rh. hominis és Rh. a lárvákat emberi ürülékből, vizeletből és vaginális tamponokból izolálták (19-21). Ennek ellenére nem sok esetben jelentettek tüneti fertőzést emberekben (21-24). Feng és Li (25) két emberi húgyúti fertőzéses esetet írt le R. axei Kínában, és Ahn et al. (20) öt emberi esetet jelentettek a Rhabditis sp-vel való bélfertőzésről. Dél-Korea vidéki iskoláiban., Hasonlóképpen, két esetben az emberi bél fertőzés R. axei leírták Kínában (26), míg egy másik közzétett munka (21) számolt be egy eset a bél fertőzés egy 5 hónapos Brazil gyermek, aki bemutatta a láz, vizes és véres hasmenés; koprológiai vizsgálat kimutatta, tojás, lárvák és felnőttek Rhabditis sp. Meamar et al. (27) leírta a vizes hasmenés előfordulását két AIDS-ben szenvedő Iráni betegnél, akiket a lárvák és az R. axei felnőtt példányai súlyos bélfertőzéssel társítottak. Végül, Teschner et al., (24) a közelmúltban leírtak egy esetet a külső fülcsatorna fertőzés egy 37 éves férfi bemutatott gennyes otorrhea mindkét füle és akut halláskárosodás okozta Rhabditis sp. Általában Rhabditis spp. a trópusi területeken (pl. Dél-Amerikában és Afrikában) élő szarvasmarháknál-különösen az idősebb állatoknál-a külső otitis gyakori okának tekintik, és kimutatható volt még az incoercible hasmenéssel (18, 28-30) küzdő csirkék, kutyák és sertések esetében is. Tünetmentes fertőzéseket is leírtak, és ezeket a fonálférgeket gyakran pszeudoparazitáknak tekintik (28, 29).,

bár az összes székletmintában szabadon élő fonálférgeket találtak, a nyálkában és a szövettani mintákban nem találtak példányokat. Ennek a megállapításnak a lehetséges magyarázata az, hogy a fonálférgek a gazdaszervezetük különböző szöveteiben/szerveiben találhatók, az asszociációs fonálféreg/puhatestű gazdaszervezet típusától függően (15, 31, 32). Rhabditis spp. töltse ki életciklusát a csiga belsejében, anélkül, hogy károsítaná a molluscan gazdaszervezetét. Korábbi tanulmányok a szabadon terjedő afrikai csigákról (Archachatina spp. és Achatina spp.) feltárta, hogy R., axei él a gyomor-bél traktusban a csiga fogadó, ahol a teljes fonálféreg életciklusa befejeződött (31-33).

bár az afrikai óriáscsigák az R. axei gazdaszervezeteként szerepelnek, ennek a fonálféregnek az előfordulásáról csak az A. fulica kivételével néhány óriás afrikai csigafajban számoltak be, nevezetesen az Archachatina marginata ovum, Ar. marginata saturalis és Achatina achatina (31.). Másrészt a P. entomophagus világszerte elterjedt, és főként a Scarabaeoidea (34, 35) szupercsaládba tartozó trágyabogarakhoz kapcsolódik., terricolát találtak szalamandrák (14, 15) és Cruznema spp. a krikett Gryllodes laplatae (Orthoptera) (36). A parazita átvitele minden esetben a csigák érintkezésével történik szennyezett, nedves talajjal, amely gazdag bomló szerves anyagokban (31, 37). Bár a jelenlegi esetekben az összes állatot terráriában tartották hőkezelt szerves talajjal, úgy gondoljuk, hogy fertőzés történhetett az állatok megvásárlása előtt a kedvtelésből tartott üzletekben vagy tenyésztési létesítményekben.,

összefoglalva, eredményeink azt mutatják, hogy a kedvtelésből tartott óriás afrikai szárazföldi csigák több rhabditid fonálféreg tartályaként szolgálhatnak. Ez a csigafaj a leggyakrabban háziállatként tartott fajok közé tartozik, ezért gyakran az ember közvetlen közelében élnek. Ennek eredményeként lehetséges a hazai környezet szennyeződése a székletükön keresztül. Bár a parazita fonálférgeket ebben a vizsgálatban nem izolálták, az Óriás afrikai szárazföldi csigákat továbbra is a fonálférgek potenciális hordozóinak kell tekinteni, amelyek képesek opportunista betegségeket okozni az emberekben., Ezért kiemeljük a fogságban tartott csigákban a szabadon élő és parazita fonálférgek előfordulásával kapcsolatos további epidemiológiai kutatások fontosságát, és hangsúlyozzuk a szigorú ellenőrzési intézkedések szükségességét a rhabditid fonálférgek opportunista fertőzésének kockázatának csökkentése érdekében a kedvtelésből tartott csigatulajdonosokban.

szerző

Dd ‘ O és MS. Az MS és a JN végezte az elemzést. CA segített formálni a kutatást, és szerkesztette a kéziratot. Minden szerző kritikus visszajelzést adott, és hozzájárult a végleges kézirathoz.,

összeférhetetlenségi nyilatkozat

a szerzők kijelentik, hogy a kutatást olyan kereskedelmi vagy pénzügyi kapcsolatok hiányában végezték, amelyek potenciális összeférhetetlenségnek tekinthetők.

PubMed Abstract / Google Scholar