áramlási citometria vs Facs

áramlási citometria vs. FACS: mi a különbség?

az áramlási citometria és a FACS (fluoreszcencia aktivált sejtszortírozás) különböző eljárások, bár a FACS egy Flow citometriai protokollokon alapuló leszármazott eljárás. A sejtválogató technológia fejlődése nagyban hozzájárul a molekuláris tudományos tájhoz., Az Általános hozzájárulások, amit tanult, mi irányítja a gyógyszerészeti felfedezés folyamat mind a diagnosztikai kapacitás, valamint a terápiás törekvések, ami viszont vezet jobb beteg outcomes1.

mi az áramlási citometria?

az áramlási citometria olyan módszer, amely az intracelluláris molekulák és a sejtfelszín kifejeződésének vizsgálatára és meghatározására, valamint a különálló egysejtes típusok meghatározására és jellemzésére szolgál. Azt is használják, hogy meghatározzuk a sejt térfogata, sejtméret, valamint értékeli a tisztaság subpopulations amelyek izolált., Ez lehetővé teszi az egyes cellák többparaméteres értékelését körülbelül ugyanabban az időben.

az áramlási citometria hatékony eszköz, mivel lehetővé teszi mind a fizikai, mind a kémiai jellemzők egyidejű elemzését másodpercenként akár több ezer részecske számára. Ez gyors és kvantitatív módszer a sejtszuszpenzió elemzésére és tisztítására. A flow segítségével meghatározhatjuk a fenotípust és a funkciót, sőt az élő sejteket is rendezhetjük., én

Néhány mérési alkalmazások venni keresztül citometria a következők:

• Thrombocyta funkció
• csontvelő
• Perifériás vér

A két lehetséges citometria adatok kifejezés formátumok a következők:

• histograms, amely intézkedés vagy hasonlítsa össze egyetlen paraméter,
• dot-telkek, amely összehasonlítani, 2 vagy 3 paraméter egyszerre két – vagy három-dimenziós scatter-telek.

mi az a FACS?,

A FACS a fluoreszcenciával aktivált egysejtes válogatás rövidítése, amely egy áramlási citometriás technika, amely tovább növeli a funkcionalitás fokát. Kihasználva a rendkívül specifikus antitestek jelölt fluoreszkáló konjugátumok (egy fluoreszkáló molekula, úgynevezett fluorochrome), FACS elemzés lehetővé teszi, hogy egyszerre adatok gyűjtése, valamint egyfajta biológiai minta által szinte korlátlan számú különböző paraméterek. Csakúgy, mint a hagyományos áramlási citometriában, előre-scatter, oldalsó-scatter, fluoreszcens jeladatokat gyűjtünk.,i

áramlásmérő gép segítségével a folyadékáramban szuszpendált sejteket vagy más részecskéket egyetlen fájlban lézersugárral továbbítják, és a lézerfénnyel való kölcsönhatást egy elektronikus fényérzékelő berendezéssel mérik, mint fényszórás és fluoreszcencia intenzitás. Ha egy fluoreszcens marker kötődik egy sejtkomponenshez, akkor a fluoreszcencia intenzitása ideális esetben az adott áramlási sejtkomponens mennyiségét képviseli.

a cellaszortálás fejlett cellaszortírozó műszerekkel magas specificitással és magas színvonalon történik., A kutatók szeretik az áramlási citometriai módszereket alkalmazni, mert ez a leggyorsabb és leghatékonyabb módszer a mérés alkalmazására az egész sejtfolyamatban. Az operátor előre meghatározza vagy kiválasztja bizonyos paramétereket a cellák rendezésének módjáról. i

Ezen a ponton a sejtválogató gép elektromos töltést ró minden cellára úgy, hogy a cellákat töltés szerint (elektromágnesek segítségével) külön edényekbe rendezzék az áramlási kamrából való kilépéskor. A technológia, hogy fizikailag rendezni heterogén keveréke sejtek különböző populációk hasznos számos terápiás és klinikai alkalmazások.,

a FACS és az áramlási citometria közötti kapcsolat megértése

ahhoz, hogy a FACS analízis és az áramlási citometria közötti kapcsolatot egyszerű kontextusban fogalmazzuk meg, alapvetően partnerek a sejtelemzési folyamatban. A FACS-t sejtszorterként használják, és a sejtek egy részhalmazához dúsítják, amelyet gyakran tovább vizsgálnak áramlási citometriával vagy más analitikai technikákkal.2

az áramlási citometriát sejtelemzésre használják, és a sejtek vegyes populációján belül a fehérje expressziójának vagy koexpressziójának mérésére összpontosít., Mind az áramlási citometriát, mind a FACS-t úgy fejlesztették ki, hogy megkülönböztesse a sejteket optikai szűrőik szerint.

a két cellás jellemzési mód közötti legfontosabb különbség a használt módszer funkcionalitásában rejlik.

mind az áramlási citometriát, mind a FAC-t általában felcserélhetően használják. Mindkettőt úgy fejlesztették ki, hogy optikai tulajdonságaik szerint megkülönböztessék a sejteket. A módszertanban azonban vannak különbségek, amelyek különböznek egymástól, és eltérő eljárási eredményekkel rendelkeznek., Az eredmények egyoldalúak, és együtt használják őket, az eredmények több cellaméret kifejezései3.

–A FACS egy olyan folyamat, amelynek során a sejtek mintakeverékét fényszórási és fluoreszcencia-jellemzőik szerint két vagy több tartályba sorolják.

–az áramlási citometria olyan módszer, amelyet a sejtek heterogén populációjának különböző sejtfelszíni molekulák, méret és térfogat szerinti elemzése során alkalmaznak, amely lehetővé teszi az egyes sejtek vizsgálatát.,

-FACS együtt citometria lehet mérni, illetve jellemzik több cella generációk segítségével rendkívül specifikus antitestek ellátott fluoreszkáló festékek, kutató végezhet FACS elemzés egyidejűleg gyűjteni kifejezés adatok fajta sejt minták által a változók száma.

hogyan használják az áramlási Citometriát és a FAC-kat klinikai alkalmazásokban

Immunofenotipizálás: az egyik leggyakoribb alkalmazásformátum az immunofenotipizálás. Ez egy olyan módszer, amely azonosítja és számszerűsíti a sejtek több populációját egy heterogén mintában., Ide tartoznak a perifériás vér, a csontvelő és a nyirok anyagok. Az immunofenotipizálást elsősorban hematológiai beállításokban alkalmazzák bizonyos rákok, azaz rosszindulatú limfóma és/vagy leukemia diagnosztizálására4.

Sejtrendezés: a sejtszorterek fejlődése a sejtek külön csövekbe történő szelíd izolálására irányul. Speciális áramlásmérők, amelyek képesek kihallgatni és jellemezni az egyes cellákat, amikor áthaladnak a lézeren, és kifejezik a sejt kritikus mérési adatait., A kulcsot kvantitatív értelemben is mérik – a műszerek képesek kezelni azokat a nagy mennyiségeket, amelyek a mikroszkópos vizsgálatot elavulttá teszik.

sejtciklus-elemzés: áramlási citometriával és FAC-okkal a sejt a teljes sejtciklus mind a négy különböző fázisában elemezhető és mérhető. A sejtalapú vizsgálatok ezután segíthetnek a sejt anomáliák meghatározásában bizonyos fluoreszkáló színezékek alkalmazásával. Az egysejtes genomika területe mindkét módszert használja egy sejttípus tanulmányozására egy sejtpopuláció számára.,

apoptózis: az apoptózis vagy a programozott sejthalál az eukarióta sejtek életciklusának normális része. A sejtek különböző okokból halnak meg: nekrózis útján, amelyet a sejt külső fizikai és kémiai változásai vagy apoptózis okoz, egy olyan folyamat, amelyben a sejtek belsőleg ellenőrzött tényezőkön keresztül kezdeményeznek “öngyilkos” programot. Ez a két különböző típusú sejthalál, apoptózis és nekrózis, áramlási citometriás módszerrel azonosítható, és a haldokló sejtekben előforduló morfológiai, biokémiai és molekuláris változások meghatározására használható.,

Sejtproliferációs vizsgálatok: a sejtalapú vizsgálatok az egyik legfontosabb eszköz bizonyos ingerekre, például növekedési faktorokra, citokinekre és egyéb médiumkomponensekre adott hatásmechanizmus-válaszok mérésére. Az áramlási citométer úgy mérheti a proliferációt, hogy a nyugalmi sejteket sejtmembrán fluoreszkáló festékkel, karboxifluoreszcein szukcinimidil-észterrel (CFSE) címkézi. Amikor a sejtek aktiválódnak, elkezdenek szaporodni, mitózison mennek keresztül. Ahogy a sejtek osztódnak, az eredeti festék fele átkerül minden lánycellára., A fluoreszcencia jel csökkenésének mérésével a kutatók kiszámíthatják a sejtek aktiválódását és proliferációját.

intracelluláris kalcium-fluxus: a sejtek kommunikálnak a környezetükben a jelátviteli utakon keresztül. Amikor ezek az utak aktiválódnak, a membránhoz kötött kalciumion-csatornák pumpálják a kalciumot a sejtbe, és gyorsan növelik az intracelluláris kalciumkoncentrációt. A magasabb kalciumszint biztosítja a sejt számára az energiát, hogy reagáljon. Az áramlási citométer képes kimutatni a kalcium sejtbe jutását, valamint részletes mérési adatokat szolgáltatni5.,

az intracelluláris jellemzők értékelésére szolgáló áramlási-citometriás technikák terjeszkedése mozgatja ezt a platformot a sejtfunkció meghatározásának arénájába. Ezek az újabb megközelítések bővítik az áramlási citometria hasznosságát, mint értékes eszközt az immunfunkció mélyebb megértéséhez és bizonyos sejtek szerepéhez, amikor az apoptózis mutatóit felfedi., A hívás életképességének javításával a továbbfejlesztett technológia révén, valamint a sejthalál vagy az apoptózis felismerésével a technológia segít a kutatóknak megérteni, hogy miért történik ez, valamint a biokémiai változások, amelyek a sejtaktivitás egyes fázisaira jellemzőek. A jelutak feltérképezése és a DNS-fragmentáció olyan technika, amelyet a molekuláris genetikusok nagyon értékesnek találnak. úgy tűnik, hogy az mRNS alapú terápiás megoldások kulcsfontosságúak a szisztémás betegségekhez kapcsolódó rejtvények megoldásában6.,

ahogy közelebb kerülünk ahhoz, hogy a sejtanalitikai folyamatot 3D technológián keresztül kihasználhassuk, könnyű belátni, hogy a megszerzett tudás nagyobb innovációhoz vezet. A kutatóközösség várakozással tekint a molekuláris tudomány takarójának nyújtására, hogy magában foglalja az őssejt-technológiát. Az őssejtekkel és azzal a képességgel, hogy hatékonyan klónozzák őket, és bevezessék őket a testbe, hogy rendszerváltozást hozzanak létre, ott van a jövő., Láthatjuk, hogy az áramlási citometria és a FACS különböző módszertanai végül hogyan eredményeznek pozitívabb betegeredményeket, terápiás beavatkozásokat, valamint a rákos daganatok egynapos teljes lízisét. A genetikai betegség hamar lelepleződik, és számos új felfedezés megjelenése új mozgalmat indított el a biológiai és molekuláris tudományban7.

Forrás:

2 2https: / / www.sciencedirect.,com/science/article/abs/pii/0022175981902532

3 https://sciencing.com/understand-flow-cytometry-results-5805206.html

4 https://www.cancer.gov/publications/dictionaries/cancer-terms/def/immunophenotyping

5 https://journals.sagepub.com/doi/abs/10.1177/1087057104264038

6 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4623474/

7 https://www.nature.com/scitable/topicpage/cdk-14046166/