Le laboratoire microbiologique de NIOMs est approuvé en tant que Laboratoire de classe 2 par le ministère norvégien de la santé et est approuvé pour travailler avec des GMM contenus (microorganismes génétiquement modifiés). Le laboratoire est équipé d’installations pour les tests antibactériens et la croissance du biofilm sur les surfaces des matériaux.
Biofilm
le Biofilm est cultivé sur du biomatériau dans des puits de microtitres ou dans un réacteur de biofilm. Des composés antibactériens peuvent être incorporés ou enduits à la surface du biomatériau., Différentes techniques sont utilisées pour étudier leur effet sur la formation et la croissance du biofilm. La quantité de biofilm peut être quantifiée après coloration à la safranine, et également être visualisée par microscopie électronique. La viabilité du biofilm peut être déterminée par coloration vivante/morte et microscopie fluorescente/confocale, analyse de résazurine, analyse XTT ou par comptage de viabilité après détachement du biofilm suivi d’un placage sur des plaques de gélose nutritive.
la méthode de L’Unité de formation de Colonies (UFC) peut être utilisée pour l’identification des micro-organismes et pour tester l’effet des substances et techniques antimicrobiennes., C’est une méthode sensible et largement acceptée en microbiologie. Dans cette méthode, le nombre de cellules vivantes (cellules capables de se reproduire) présentes dans une suspension est compté sur une surface de gélose nutritive.
Les cellules bactériennes sont collectées et dispersées dans une solution non toxique telle qu’une solution saline tamponnée au phosphate ou de l’eau physiologique. La suspension cellulaire est ensuite diluée, normalement en série avec une dilution de 10 fois, afin d’obtenir des plaques avec un nombre dénombrable de bactéries., Une certaine quantité de chaque dilution est plaquée, en répétitions de 3 ou 4, sur des boîtes de Pétri avec de la gélose nutritive destinée aux bactéries en question. Les boîtes de Pétri sont incubées dans des environnements appropriés et pendant un temps approprié avant que les colonies ne soient comptées. Chaque colonie qui peut être comptée est appelée Unité de formation de colonies (UFC), et le nombre d’UFC est lié au nombre viable de bactéries dans l’échantillon. Le nombre de bactéries dans l’échantillon d’origine est calculé mathématiquement, en tenant compte de la quantité plaquée et de son facteur de dilution., Les résultats sont souvent présentés comme UFC / ml (unités formant colonie par millilitre) pour les liquides, et ufc/g (unités formant colonie par gramme) pour les solides.
technique de placage en spirale
la méthode traditionnelle de dilution et de placage prend du temps et, par conséquent, le nombre de variables dans un test peut être limité. Le laboratoire de microbiologie de NIOM utilise donc une technique de placage en spirale où un instrument, le Wasp spiral plater (Figure 1), dépose un volume donné d’échantillon sur une plaque de gélose rotative.,
Le volume de l’échantillon déposé par unité de surface de la plaque diminue à travers la spirale, ce qui entraîne un effet de dilution, et permet le comptage des colonies isolées (Figure 2) dans les secteurs respectifs de volume de dépôt connu.
pour le comptage des bactéries, NIOM utilise un compteur de colonies automatisé, aCOLyte, et les résultats sont transférés directement à Excel pour une analyse plus approfondie.