virtaussytometria vs. FACS: Mitä Eroa?
virtaussytometria ja FACS (fluoresenssi-aktivoida solun lajittelu) ovat selvästi eri menettelyjä, vaikka FACS on jälkeläinen menettely perustuu virtaussytometria-protokollia. Edistysaskeleet solulajittelutekniikassa vaikuttavat merkittävästi molekyylitiedemaisemaan., Yleistä maksut, mitä on oppinut on se, mikä ohjaa lääkealan löytö prosessi sekä diagnostisia valmiuksia ja myös terapeuttisia pyrkimyksiä, mikä puolestaan johtaa parempaan potilaan outcomes1.
mikä on Virtaussytometria?
virtaussytometria on menetelmä, jota käytetään tutkia ja määrittää ilmaisun solunsisäinen molekyylit ja solun pinnalla ja määritellä ja luonnehtia eri yhden solun tyypit. Sitä käytetään myös eristettyjen alapopulaatioiden solutilavuuden, solun koon ja puhtauden määrittämiseen., Tämä mahdollistaa yksittäisten solujen moniparametrisen arvioinnin suunnilleen samaan aikaan.
virtaussytometria on tehokas väline, koska se mahdollistaa jopa tuhansien hiukkasten fysikaalisten ja kemiallisten ominaisuuksien samanaikaisen analysoinnin sekunnissa. Tämä tekee siitä nopean ja määrällisen menetelmän analysoimiseksi ja puhdistamiseksi solususpensiossa. Flow ’ n avulla voimme määrittää fenotyypin ja toiminnan ja jopa lajitella eläviä soluja., minä
Joitakin mittaus-sovellusten kautta otettavat virtaussytometria ovat:
- Verihiutaleiden toimintaa
- luuytimen
- ääreisverenkierron
kaksi potentiaalista virtaussytometria tiedot ilmaisun muotoja ovat:
- histogrammit, jotka mittaavat tai vertailla vain yksi parametri,
- piste-tontteja, joka vertaa 2 tai 3 parametrit samanaikaisesti kaksi – tai kolmiulotteinen scatter-tontti.
mitä FACS on?,
FACS on lyhenne fluoresenssi-aktivoida yhden solun lajittelu, joka on virtaussytometria tekniikka, joka edelleen lisää jonkin verran toiminnallisuutta. Hyödyntämällä erittäin spesifisiä vasta-aineita merkitty fluoresoivien konjugaattien (fluoresoiva molekyyli nimeltään fluorochrome), FACS-analyysi antaa meille mahdollisuuden samanaikaisesti kerätä tietoja, ja tavallaan biologinen näyte, jonka lähes rajaton määrä erilaisia parametreja. Kuten tavanomaisessa virtaussytometriassa, kerätään eteenpäin-scatter, side-scatter ja fluoresoiva signaalitiedot.,minä
virtaussytometrilla kone, soluja tai muita hiukkasia keskeytetään nestettä stream läpi lasersäde yhden tiedoston muoti, ja vuorovaikutus laser valo mitataan sähköisen valo ilmaisin, laite, kuten valon sironta ja fluoresenssi-intensiteettiä. Jos fluoresoiva merkkiaine sitoutuu solun osa, fluoresenssi-intensiteetti on mieluiten edustavat määrä, että erityisesti flow cell-osan.
solulajittelu edistyneiden solulajittelulaitteiden avulla suoritetaan erittäin spesifisesti ja korkeatasoisesti., Tutkijat, kuten käyttämällä virtaussytometria menetelmiä, koska se on nopein ja tehokkain tapa soveltaa mittaus koko solun prosessi. Operaattori määrittää tai valitsee tietyt parametrit siitä, miten solut olisi lajiteltava. minä
tässä vaiheessa, solun lajittelu kone asetetaan sähkövaraus jokaisen solun niin, että solut lajitellaan maksu (käyttäen sähkömagneetit) erillisiin alusten poistuttaessa virtaus kammioon. Tekniikka fyysisesti lajitella heterogeeninen seos solujen osaksi erilaisia populaatioita on hyödyllinen monia terapeuttisia ja kliinisiä sovelluksia.,
Ymmärtäminen Suhde FACS ja virtaussytometria
Voit laittaa sen suhdetta FACS-analyysi ja virtaussytometria yksinkertaisia yhteydessä, ne ovat pohjimmiltaan kumppaneiden solu-analyysin prosessi. FACS käytetään solun lajittelija ja rikastettu osajoukko soluja, jotka on usein sitten tutkittu tarkemmin käyttäen virtaussytometria tai muiden analyyttisten techniques2.
virtaussytometria käytetään solu-analyysin ja keskittyy mittaus-proteiinien ilmentymistä tai co-ilmaisun sisällä sekapopulaatioon soluja., Sekä Virtaussytometria että faksit on kehitetty erottamaan solut optisten suodattimiensa mukaan.
keskeinen ero kahden solun luonnehdinta säännöt piilee metodin käytössä.
sekä Virtaussytometriaa että FACS: ää käytetään yleensä vaihdellen. Ne molemmat on kehitetty erottamaan soluja niiden optisten ominaisuuksien mukaan. Menetelmissä on kuitenkin joitakin eroja, jotka ovat erillisiä ja joilla on erilaiset menettelylliset tulokset., Käytetty tavattoman tulokset ovat yksipuolisia, ja käytetään yhdessä, tulokset ovat ilmaus tietoja useista solun parameters3.
–FACS on prosessi, jonka näyte solujen sekoitus on lajiteltu mukaan niiden valon sironta ja fluoresenssi ominaisuudet kahteen tai useampaa konttia.
–virtaussytometria on menetelmä, jossa hyödynnetään aikana analyysi heterogeeninen väestö solujen mukaan eri solun pinnan molekyylejä, koko ja tilavuus, joka mahdollistaa tutkimuksen yksittäisten solujen.,
-FACS yhdessä virtaussytometria voi mitata ja kuvata useita solu sukupolvien käyttämällä erittäin spesifisiä vasta merkitty fluoresoivia väriaineita, tutkija voi suorittaa FACS-analyysi ja samanaikaisesti kerätä ilmaisun tietoja ja lajitella solun näytteitä useita muuttujia.
Miten virtaussytometria ja FACS Käytetään Kliinisissä Sovelluksissa.
Immunophenotyping: Yksi yleisimmistä sovellus formaatteja käytetään immunophenotyping. Tämä on menetelmä, jolla tunnistetaan ja kvantifioidaan useita solupopulaatioita yhdessä heterogeenisessä näytteessä., Tämä sisältää perifeerisen veren, luuytimen, ja lymph materiaalia. Immunofenotyypitystä käytetään ensisijaisesti hematologisissa olosuhteissa tiettyjen syöpien eli pahanlaatuisen lymfooman ja/tai leukemian4 diagnosointiin.
Solun Lajittelu: Kehitysten solun lajittelijat ovat suunnattu lempeä eristäminen solujen erilliset putket. Erikoistuneita virtausmittareita, joilla on kyky kuulustella ja luonnehtia jokaista solua sen kulkiessa laserin läpi ja ilmaista solun ratkaisevia mittaustietoja., Avain tässä mitataan myös määrällisesti-instrumentointi pystyy käsittelemään suuria määriä, jotka tekevät mikroskooppisen tutkimuksen tarpeettomaksi.
solusyklin Analyysi: virtaussytometria ja FACS, solu voidaan analysoida ja mitata kaikki neljä eri vaihetta koko solusyklin. Solupohjaiset määritykset voivat sitten auttaa solujen poikkeavuuksien määrittämisessä tiettyjen fluoresoivien väriaineiden avulla. Yksisoluisen genomiikan alalla käytetään molempia menetelmiä yhden solutyypin tutkimiseen solupopulaatiolle.,
apoptoosi: apoptoosi eli ohjelmoitu solukuolema on eukaryoottisten solujen elinkaaren normaali osa. Solut kuolevat eri syistä: kautta kuolio, tuoma ulkoinen fysikaaliset ja kemialliset muutokset solun tai apoptoosin, prosessi, jossa solut käynnistää ”itsemurha” – ohjelman kautta sisäisesti ohjattu tekijät. Nämä kaksi eri tyyppiä solukuoleman, apoptoosin ja nekroosin ja voi olla tunnistettu kautta flow cytometric menetelmiä ja käytetään määrittämään, morfologisten, biokemiallisten ja molekyylitason muutoksiin kuolla solujen.,
Solujen Lisääntymistä Määritykset: solupohjaiset määritykset ovat yksi keskeisiä työkaluja mitata vaikutusmekanismi vastauksia tiettyihin ärsykkeisiin, kuten kasvutekijöitä, sytokiineja ja muita median komponentteja. Virtaussytometri voi mitata proliferaatiota merkitsemällä leposoluja solukalvon fluoresoivalla väriaineella, karboksifluoreseiinisukkinimidyyliesterillä (CFSE). Kun solut aktivoituvat, ne alkavat lisääntyä ja käyvät läpi mitoosin. Solujen jakautuessa puolet alkuperäisestä väriaineesta siirtyy kullekin tytärsolulle., Mittaamalla fluoresenssisignaalin pienenemistä tutkijat voivat laskea solujen aktivoitumisen ja proliferaation.
Solunsisäisen Kalsiumin Flux: Solut sekoittuvat vuorovaikutuksessa niiden ympäristön kautta transduktioreittien reittejä. Kun nämä reitit ovat käytössä, kalvo-sidottu kalsiumioni-kanavat pumppu kalsiumin soluun ja nopeasti lisätä solunsisäistä kalsiumpitoisuutta. Korkeammat kalsiumpitoisuudet antavat solulle energiaa vasteeseen. Virtaussytometri pystyy havaitsemaan kalsiumin vuon soluun ja toimittamaan yksityiskohtaiset mittausdata5.,
kokouksen
laajentaminen flow cytometric tekniikoita arvioida solunsisäinen ominaisuudet liikkuu tämä foorumi areenalle määrittämiseksi solujen toimintaa. Nämä uudemmat lähestymistavat laajentavat hyödyllisyys virtaussytometria arvokas väline syvempää ymmärrystä immuunijärjestelmän toimintaa ja roolia tiettyjä soluja, koska se alkaa paljastaa indikaattorit apoptoosin., Parantamalla soittaa elinkelpoisuuden parantamalla tekniikkaa ja tunnustaa, solukuoleman tai apoptoosin, teknologia palvelee auttaa tutkijoita ymmärtämään, miksi se tapahtuu ja biokemiallisia muutoksia, jotka tapahtuvat kunkin vaiheen solujen toimintaa. Signaalireittien kartoittaminen ja DNA: n pirstoutuminen on tekniikka, jota molekyyligeneetikot pitävät erittäin arvokkaana. mRNA-pohjaiset terapeuttiset ratkaisut näyttävät olevan avainasemassa ratkaistaessa joitakin systeemiseen sairauteen liittyviä arvoituksia6.,
Kun siirrymme lähemmäs pysty hyödyntämään solun analyyttisen prosessin kautta 3D-tekniikka, se on helppo nähdä, miten saatu tieto johtaa suuriin innovaatioihin. Tutkimusyhteisö odottaa innolla molekyylitutkimuksen peiton venyttämistä kantasoluteknologiaan. Kantasoluilla ja kyvyllä kloonata ne tehokkaasti ja esitellä ne keholle järjestelmämuutoksen luomiseksi on se, mihin tulevaisuus on menossa., Voimme nähdä, kuinka virtaussytometria ja eri menetelmät FACS lopulta johtaa enemmän myönteisiä hoitotuloksia, terapeuttisia interventioita, ja ehkä yhden päivän täydellinen hajoaminen syöpä kasvaimia. Geneettinen sairaus paljastuu nopeasti, ja monien uusien löytöjen näyttäminen on aloittanut uuden biologisen ja molekyylitiedon liikkeen7.
lähteet:
22https:/ / www.sciencedirect.,com/science/article/abs/pii/0022175981902532
3 https://sciencing.com/understand-flow-cytometry-results-5805206.html
4 https://www.cancer.gov/publications/dictionaries/cancer-terms/def/immunophenotyping
5 https://journals.sagepub.com/doi/abs/10.1177/1087057104264038
6 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4623474/
7 https://www.nature.com/scitable/topicpage/cdk-14046166/