Rajoja ja Eläinlääketieteen

Johdanto

Selkärangattomat ovat noin miljoona eläinlajia pidetään sekä eläintarhat toimielinten ja kotitalouksissa, joissa he ovat käsi nostettu eksoottisia lemmikkejä (1). Kotiloihin kuuluu lähes 60 000 vesieliölajia sekä maanpäällisiä nilviäisiä, pääasiassa etanoita ja etanoita (1). Jättiläisafrikkalainen maakotka (”Achatina fulica”, syn., Lissachatina fulica) on kotoisin Itä-Afrikassa, mutta se on laajalle levinnyt invasiivinen laji Aasiassa, Oseaniassa, ja enemmän äskettäin Amerikassa, joissa se on otettu käyttöön vahingossa tai tarkoituksellisesti elintarvikkeiden lähde, ja kuin lemmikki. Sen vapautuminen luonnon ekosysteemeissä, maataloudessa ja kaupungeissa on aiheuttanut ekologisia, terveydellisiä ja maatalousuhkia (2, 3). Giant African land snail on väli-isäntiä useat loiset kuten Aelurostrongylus abstrusus, Angiostrongylus cantonensis, Angiostrongylus costaricensis, Schistosoma mansoni, Hymenolepis spp.,, ja Fasciola hepatica (4, 5). Kaikki edellä mainitut helmintit, lukuun ottamatta A. abstrususta, pystyvät aiheuttamaan vakavia sairauksia ihmisillä. Erityisesti giant African land snail on tärkein kotilo vastuussa maailmanlaajuisesta leviämisestä A. cantonensis, joka aiheuttaa ihmisen eosinofiilinen meningoenkefaliitti Aasiassa ja Amerikassa (2, 6). Riskitekijöitä infektion ihmisillä, lemmikit ja villieläinten kanssa ne suolimadon loisia sisältävät nieleminen raaka tai huonosti kypsennettyä tartunnan etanat tai etanoita, tai elintarvikkeita saastuttamia lima tartunnan etanat tai etanoita (4, 5, 7, 8).,

Vaikka Afrikan jättiläinen maa etanat ovat suosituimpia etanat pidetään lemmikkeinä, ja niiden maailmanlaajuinen suosio eksoottisia lemmikkejä kasvaa nopeasti, vain muutamia tutkimuksia on tehty esiintyminen niiden loisia luonnon olosuhteet (2, 6, 9-11). Tutkimuksen tavoitteena oli tutkia loisten esiintymistä Etelä-Italiassa lemmikkieläimiksi kasvatetuissa Afrikan jättiläismäisissä maaetanoissa.,

Materiaalit ja Menetelmät

Yleiset Tiedot

elokuussa 2018, kolme allasta tuoreen ulosteen näytteitä saatu yhteensä 60 jättiläinen Afrikkalainen maa etanat, pidetään kolme eri yksityiskokoelmista sijaitsee kaupungissa Pozzuoli, Caserta ja Napoli (Italia), tutkittiin loiset. Jokaiselta paikkakunnalta saimme ulostealtaan 20 yksittäisestä etanasta. Etanat mukana tässä tutkimuksessa iän mediaani oli 1,6 vuotta vaihtelee 0,2-2 vuotta ja ei ollut saanut mitään edellisen anti-loisten hoito., Etanat olivat fed tuoreet vihannekset ja hedelmät; lisäksi, kalsium jauhetta lisäravinteen (Kalsium, Exo Terra, Hagen Deutschland GmbH: & Co. KG, Holm, Saksa) tarjottiin kahdesti viikossa. Kaikki eläimet kasvatetaan Italiassa, yksityisomistuksessa ja pidetään lemmikkeinä neljä sisätiloissa terraariot 60 × 30 × 45 cm koko, ryhmissä 10-20 eläimet (2 ryhmää 20 etanoita Pozzuoli ja Casertan ja 2 ryhmät 10 etanat jokainen Napoli)., Orgaaninen turve maaperän (Orgaaninen Kookos-Turve -, E-Coco Tuotteita, Gloucestershire, UK), aiemmin lämpökäsitelty (100°C: ssa 30 min) ja sitten vapaa loisia ja hyönteisiä, käytettiin substraattina.

diagnostiset toimenpiteet

kahdenkymmenen gramman verran tuoretta ulostetta saatiin aluksi jokaisesta neljästä terraariosta., Kun yhdistetään ulostetta analysoitiin tuoretta kokeena, vaahdotus ja Baermann-testi osoitti, positiivisuus rhabditid sukkulamadot, kaksi etanat kustakin positiivisesta terraario oli sijoitettu erikseen steriilissä muovinen laatikko, ja niiden ulosteet kerättiin välittömästi ulostamisen jälkeen, steriiliin 50 ml: n muoviputkeen. Coprological tutkimusta varten koottava ja yksittäisten näytteiden mukana tuoreita kokeena, keskipako-vaahdotus (2 g ulostetta kunkin testi) käyttäen liuosta sokeria ja formaldehydi (ominaispaino on 1,27) ja Baermann-testi (10 g ulostetta kunkin testi)., Lisäksi tuoreessa kokeessa saatu Lima analysoitiin valomikroskoopilla. Koska toukkamuodot useita suolimadon lajit voivat encyst sisällä jalka lihas etanat, histologinen tutkimus biopsia näytteet kerättiin etu-ja taka-alueilla jalka lihas tehtiin 30 etanat, nukutetaan tekniikka kuvattu Giannelli et al. 12) sekä Gilbertson ja Wyatt (13., Biopsia näytteet olivat kiinteä 10% neutraali fosfaatti-puskuroitua formaliinia, ja käsitellä rutiini menetelmiä osaksi parafiini lohkoja, jotka olivat leikataan 3 µm paksut kohdat, ja värjätään hematoksyliini-ja eosiini. Tutkimus tehtiin sen käytännön luvalla, jossa se tapahtui, ja allekirjoitetun, kirjallisen omistajan suostumuksella.

Morfologinen Tunnistaminen

Väliaikaiset kiinnikkeet tehtiin lämpö-tappaa sukkulamadot lasi liukuu pisara vettä, jonka jälkeen lasi kansi lipsahdus oli sovellettu., Sukkulamadot siirrettiin osaksi pisara vesijohtovettä lasilevylle ja sijoitettu lämmitin (100°C) 10 s. Näitä näytteitä käytettiin morfologinen tunnistaminen. Havainnointiin käytettiin AMPLIVALOMIKROSKOOPPIA, Carl Zeiss Jenaa ja Nomarski-optiikalla varustettua Leitz Diaplania., Morfologinen tunnistaminen rhabditid sukkulamadot seurasi Andrassy (14) ja Andrassy (15) ja se oli enimmäkseen perustuvat morfologia nielun ja avanne, ja sukuelimiin, pääasiassa ominaisuuksia osasivat, lukumäärä ja sijainti pötsinystyt tai läsnäolo ja koko tai muoto bursa miehillä; ja hännän muoto, asema häpy ja morfologia sukuelimiin naisilla. Toukkien tunnistaminen perustui pyrstön muotoon.

Molekyyli Analyysi

DNA uutettiin sukkulamato yksilöt saatu ulosteet kiinteitä 96% etanoli kerätty kolmella paikkakunnalla., Sukkulamadot pestiin kahdesti tislattua vettä (ddH2O) yön yli, ennen molekyylitason analyysi, täydellinen poistaminen jäämät etanolia. Kunkin yksittäisen sukkulamato siirrettiin steriiliin Eppendorf-putkeen (200 µl) 20 µl uuttopuskuria (17.7 µl: aan ddH2O, 2 µl 10 × keskittynyt PCR-puskuri, 0.2 µl 1% Tween 20 ja 0,1 µl proteinaasi-K). Puskuria ja sukkulamatoja jäädytettiin -20°C: ssa 20 minuutin ajan, minkä jälkeen niitä inkuboitiin välittömästi 65°C: ssa 1 tunnin ajan ja sen jälkeen 10 min 95°C: ssa., Lysaatit jäähdytettiin jäällä ja sentrifugoitiin (2 min, 9 000 g); PCR: ään käytettiin 1 µl supernatanttia.

fragmentti rDNA, joka sisältää sisäistä puhtaaksi spacer alueilla (ITS1, 5.8 S ja ITS2) oli monistetaan käyttäen alukkeita 18: 5′-TTG ATT ACG TCC CTG CCC TTT-3′ (eteenpäin), ja 28S: 5′-CAC TTT TCG CCG TTA CTA AGG-3′ (reverse) (16). Fragmentti rDNA, joka sisältää geenin 18S rRNA oli monistetaan käyttäen alukkeita 22F: 5′- TCC AAG GAA GGC AGC AG: n GC-3′ (eteenpäin), ja 1080JR: 5′- TCC TGG TGG TGC CCT TCC GTC AAT TTC-3′ (reverse) (17). PCR master mix koostui: ddH2O, 7.,25µl; 10 x PCR-puskuri, 1.25 µl; deoxynucleoside trifosfaateiksi (dNTPs), 1 µl; 0.75 µl sekä eteen-että taaksepäin pohjamaali; – polymeraasi, 0.1 µl; ja 1 µl DNA-uutetta. PCR-profiilit käytettiin seuraavasti: SEN 1 sykli 94°C 7 min jälkeen 35 sykliä 94°C 60 s, 50°C 60 s ja 72°C 60 s, ja lopullinen pidennys 72°C 7 min (14); for 18 1 sykli 94°C 5 min, jonka jälkeen 35 sykliä 94°C 60 s, 55°C 90 s ja 72°C 2 min ja lopullinen pidennys 72°C 10 min., PCR-tuotteet sekvensoitiin, jonka GATC Biotech (Saksa) ja myöhemmin muokata ja ladata GenBank (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/).

Tulokset

Baermann-testi paljasti sukkulamatojen toukkia, joiden pituus vaihteli 170 336 µm, kaikissa näytteissä. Munat, toukat ja aikuisten rhabditid sukkulamadot havaittiin tuore kokeena ja vaahdotus menetelmiä kaikissa ulosteen näytteitä. Rhabditella axel (Kuva 1) oli tunnistaa morfologisesti kaksi kolmesta yhteen ja yksittäisten ulosteen näytteet Pozzuoli ja Napoli. Lisäksi, Rhabditis terricola, Cruznema sp.,, ja Pristionchus entomophagus eristettiin yhdestä altaasta ja yksittäisistä ulostenäytteistä Casertasta. Lihasbiopsianäytteissä tai Limassa ei havaittu loisia.

Useita morfologiset tyypit rhabditid sukkulamadot oli eristetty etana kiinteä ulostetta 96% etanolia. Saatu ja muokata sekvenssit SEN ja 18S nämä sukkulamadot verrattiin (BLAST) kanssa materiaalin GenBank ja tunnistettu R. axel (osittainen 18, liittymistä numero MK124578, samankaltaisuus 99%), Rh., terricola (osittainen 18-VUOTIAAT ja osittainen ITS1 -, liittymis-numero MK156052, samankaltaisuus 100%), P. entomophagus (osittainen 18-VUOTIAAT ja osittainen ITS1 -, liittymis-numero MK156050, samankaltaisuus 99%) ja Cruznema sp. (osittainen 18S ja osittainen it1, liittymisnumero MK156051, samankaltaisuus 96-100%).

Keskustelua

tämän tutkimuksen tulokset osoittavat, että kaikki tarkastellut jättiläinen Afrikkalainen maa etanat munivat munia, toukkia ja aikuisia rhabditid sukkulamadot ulosteet, ja voi siten olla tartunnan lähde muita lemmikkejä ja ihmisiä. Jotta vältyttäisiin vääriltä samaistumisilta Strongyloides sp: hen., sukkulamato lajit osoittaa lähellä yhdennäköisyys rhabditids, että on selvää, loistaudit zoonoottinen merkitys (14, 15, 18), alkuperäinen morfologinen diagnoosi rhabditid sukkulamadot oli vahvistettu kautta molekyylitason analyysit.

Rhabditidae ovat vapaana elävät saprofyyttisten sukkulamadot, laajalti löytyy maaperän ja orgaaninen roskat, jossa ne syövät pääasiassa bakteereja. Monet kotilolajit voivat toimia lopullisina isäntinä rhabditid-sukkulamadoille (14, 15). Kuitenkin, useita Rhabditis ja Rhabditella laji on liittynyt selkärankaisten, mukaan lukien ihmiset (14, 15, 19-27)., Vaikka niiden esiintyminen voi johtua ympäristön saastumisesta, nämä sukkulamadot voivat aiheuttaa sairauksia monille eläimille ja ihmisille. Rhabditis elongata, Rh. homineja ja Rh: ta. usuii-toukkia on eristetty ihmisen ulosteista, virtsasta ja emättimen pyyhkäisynäytteistä (19-21). Oireilevia infektioita ei kuitenkaan ole raportoitu ihmisillä kovinkaan paljon (21-24). Feng ja Li (25) on kuvattu kahden ihmisen tapauksissa virtsan infektio R. axel Kiinassa, ja Ahn et al. (20) raportoitu viisi ihmisen suolistotulehdusta rhabditis SP: llä. maaseudulla Etelä-Korean koululaiset., Samoin kaksi tapausta ihmisen suoliston infektio R. axel oli kuvattu Kiinassa (26), kun taas toinen julkaistu työ (21) kertoi tapauksesta, suoliston infektio, 5-kuukauden ikäinen Brasilian lapsi, joka oli kuumetta ja vetistä ja verinen ripuli; coprological tutkimus paljasti, munat, toukat ja aikuiset Rhabditis sp. Meamar ym. (27) kuvattu esiintyminen vetinen ripuli kahdella Iranilainen AIDS, liittyy vakava suoliston infektio toukat ja aikuisten yksilöiden R. axei. Lopuksi, Teschner ym., (24) äskettäin kuvattu tapauksessa ulomman korvakäytävän infektio 37-vuotias mies esitteli märkivä otorrhea sekä korvat ja äkillinen kuulon menetys aiheuttama Rhabditis sp. Yleensä Rhabditis spp. pidetään yleinen syy ulkoinen korvatulehdus, karjaa, elävät trooppisilla alueilla (esimerkiksi etelä-Amerikassa ja Afrikassa), erityisesti vanhempia eläimiä, ja on tunnistettu myös kanoja, koiria ja sikoja, joiden incoercible ripuli (18, 28-30). Oireettomia infektioita on kuitenkin kuvattu myös ja näitä sukkulamatoja pidetään usein pseudoparasiitteina (28, 29).,

vaikka kaikista ulostenäytteistä haettiin vapaasti eläviä sukkulamatoja, limanäytteistä ja histologisista näytteistä ei löytynyt yksilöitä. Mahdollinen selitys tälle havainto on, että sukkulamadot voi paikantaa eri kudoksia/elimiä niiden isännät, riippuen yhdistyksen sukkulamato/nilviäinen isäntä (15, 31, 32). Rhabditis spp. suorita sen elinkaari etanan sisällä vahingoittamatta sen nilviäisisäntää. Aikaisemmat tutkimukset vapaana elävistä afrikkalaisista etanoista (Archachatina spp. ja Achatina spp.) paljasti, että R., axei elää etana-isäntänsä ruoansulatuskanavassa, jossa koko sukkulamatojen elinkaari on päättynyt (31-33).

Vaikka Afrikkalainen jättiläinen etanat ovat listattu isännät R. axel, esiintyminen tämä sukkulamato oli raportoitu vain muutamia lajeja jättiläinen Afrikkalainen etanat muut kuin A. fulica, eli Archachatina marginata munasolu, Ar. marginata saturalis, ja Achatina achatina (31). Toisaalta, P. entomophagus on maailmanlaajuinen jakelu-ja on ollut pääasiassa liittyvät lantakuoriaiset, jotka kuuluvat superperheeseen Scarabaeoidea (34, 35), R., terricolaa on tavattu salamantereista (14 ,15) ja Cruznema spp. Sirkka Gryllodes laplatae (Orthoptera) (36). Kaikissa tapauksissa, siirto-loinen esiintyy kautta yhteyttä etanat saastuneen kostea maaperä, joka on runsaasti hajoavaa orgaanista ainesta (31, 37). Vaikka näissä tapauksissa kaikki eläimet pidettiin terraria, jossa on lämpökäsitelty orgaanisen maaperän, me spekuloida, että infektio voi olla tapahtunut ennen kuin ostaa eläimiä eläinkaupasta tai jalostus tilat.,

lopuksi, meidän tulokset osoittavat, että pet jättiläinen Afrikkalainen maa etanat voi toimia säiliö useita rhabditid sukkulamadot. Tämä etana laji on yksi yleisimmin pidetään lemmikkieläiminä, ja siksi usein elää lähellä ihmisiä. Tämän seurauksena saastuminen kotiympäristön kautta niiden ulosteet on mahdollista. Vaikka sukkulamatoja ei ollut eristetty tässä tutkimuksessa, jättiläinen Afrikkalainen maa etanat pitäisi silti olla mahdollisia kantajia sukkulamadot voivat aiheuttaa opportunistisia sairauksia ihmisillä., Tämän vuoksi korostamme, että on tärkeää edelleen epidemiologinen tutkimus, esiintyminen, vapaana elävät ja sukkulamatoja vuonna kotilo etanat pidetään vankeudessa, ja korostaa tarvetta valvoa tiukasti toimenpiteet riskin vähentämiseksi opportunistinen infektio rhabditid sukkulamadot lemmikkieläinten etana omistajat.

Tekijäosuudet

Dd ’ O ja MS suunnittelivat ja suunnittelivat analyysin. MS ja JN tekivät analyysin. CA auttoi muokkaamaan tutkimusta ja muokkasi käsikirjoitusta. Kaikki kirjoittajat antoivat kriittistä palautetta ja osallistuivat lopulliseen käsikirjoitukseen.,

eturistiriita Lausunto

kirjoittajat ilmoittavat, että tutkimus on tehty ilman mitään kaupallisia tai taloudellisia suhteita, jotka voitaisiin tulkita mahdollisia eturistiriitoja.

PubMed Abstrakti | Google Scholar