Syöpä viittaa monimutkainen ja heterogeeninen ryhmä sairauksia ominaista hallitsematon ja hallitsematon solujen lisääntymistä, joka usein hankkia kyky tunkeutua muihin kudoksiin. Syöpä yleensä peräisin somaattiset solut, minkä seurauksena useita geneettisiä mutaatioita, kiertää mekanismeja, joilla säännellään kudosten homeostaasin, kuten solu-solu-kontaktin eston, signaaleja erilaistumista ja solukuolemaa induktio., Mutaatiot vastuussa kasvain muutos koskee kahta tärkein ryhmä geenejä, kutsutaan proto-onkogeenit (stimuloivat solun sykli) ja kasvain vaimentimet (repressors solusyklin etenemiseen). Näitä toiminnallisia muutoksia voi esiintyä seurauksena yhden nukleotidin mutaatiot, mutta ne voivat johtua myös suurempia muutoksia geneettisen materiaalin, kuten lisäykset, poistot, päällekkäisyyksiä tai translokaatiot on chromosomic fragmentti. Näitä syöpäsolujen poikkeavuuksia voidaan käyttää kasvaimen biomarkkereina., Kvantifiointia muutoksia geenien kopioiden määrä-tai-geenin uudelleen järjestelyt on kriittistä ymmärrystä kasvaimen biologia, ja siksi on tärkeää geneettisten testien perusteella molekyyli sytogenetiikka profilointi.
Kuva 1: Merkintöjä DNA-koetin KALA-analyysi.
mikä on kala ?
Fluoresenssi in situ hybridisaatio (FISH) on sytogeneettinen tekniikka, jota käytetään havaitsemiseksi ja lokalisointi nukleotidin sarjoissa (DNA tai RNA) sisällä kudoksia tai soluja., Kalaa voidaan käyttää ihmisen solujen geneettisen materiaalin ”kartoittamiseen”, jolloin saadaan tietoa tiettyjen geenien tai kromosomin osien sijainnista, pituudesta ja kopioiden määrästä. Se vaatii synteesi fluoresoivasti-leimattu koetin, joka on nukleiinihapposekvenssin sidottu fluoresoiva reportteri molekyyli, joka sitten sitoa (hybridisoitua) tiettyyn kohteeseen järjestyksessä. KALA koettimet voidaan leimata eri menetelmillä (esim. nick käännös, satunnainen pohjustus), alkaen eri nukleiinihapot tuotantopanosten, kuten genomien DNA/RNA, bakteerien keinotekoiset kromosomit (BACs), tai cosmids.,
ensimmäinen askel KALA prosessi on immobilizing metafaasissa kromosomien leviää tai interphase sisältävien solujen kohde-DNA: n lasilevylle. Seuraavaksi sekä DNA-näyte että KALALUOTAIN denaturoituvat kuumuuden vuoksi. Kun anturi on kosketuksissa kohde geneettinen materiaali, se on nimenomaan sitoa sen täydentäviä järjestyksessä kromosomissa. Luotainten ja niiden sekvenssikohteiden välille muodostuneet hybridit voidaan sitten visualisoida fluoresoivalla mikroskoopilla (Kuva 1)., Yleensä, kaksi tyypit KALAA anturit voidaan erottaa: – kromosomi luettelointi anturit (CEPs tai CENs) kohdistaminen pericentromeric alueiden kromosomi ja käyttää luetella kromosomit; ja locus-erityisiä indikaattoreita (LSI) erityisesti tunnustaa geenit kiinnostavat.
Kuva 2: Esimerkki KALA tulokset: Nick Käännös DNA Labeling System 2.0 käytettiin label BAC-DNA-koetin TP53 kanssa SEEBRIGHT® Oranssi 552 dUTP ja BAC-DNA-koetin Sentromeeri 17 SEEBRIGHT® Vihreä 496 dUTP., Merkityt luotaimet risteytyivät metafaasilevitteiksi. (Institut Universitaire du Syöpä Toulouse Oncopole)
KALA on useita etuja verrattuna muihin klassisen sytogeneettinen tekniikoita, kuten G-ryhmittelyä karyotyping. Ensinnäkin sillä on korkeampi resoluutio (20-150kb vs 5Mb). Lisäksi KALA voidaan soveltaa sekä metafaasissa ja interphase kromosomeja, mikä tarkoittaa, että solut eivät tarvitse olla viljellyt useita päiviä, ennen kuin kromosomeja voi olla valmis analysoitavaksi., Tämä tarkoittaa myös sitä, että kala soveltuu erilaisten näytetyyppien, kuten kiinteiden kasvainten ja formaliini-kiinteä parafiini-upotettu (FFPE) kudosten analysointiin. Lisäksi kalaluotaimet voidaan merkitä eri fluoroforeilla, mikä mahdollistaa useiden kohteiden samanaikaisen seurannan.
KALASTUS kromosomipoikkeavuudet Syöpä
Kiitos sen monipuolisuus, KALAT voidaan käyttää sytogeneettinen analyysi sekä kiinteät kasvaimet (mm. rintasyöpä, ei-pienisoluinen keuhkosyöpä, paksusuolen ja peräsuolen syöpä) ja hematologisten tai verisyöpä (esim. leukemia, lymfooma, multippeli myelooma)., Havaitseminen geneettisiä poikkeavuuksia on hyödyllinen ei vain syövän, mutta myös keinona analysoida geneettinen taipumus ja sairaus-tarkat tiedot ja ennustaa kemoterapia-tulos.
KALA Keuhkosyövän
Keuhkosyöpä on yleisimmin diagnosoitu ja johtava syy syövän liittyviä kuolemia. Erityisesti ei – pienisoluisen keuhkosyövän (NSCLC) osuus kaikista keuhkosyövistä on ~80-85%. EGFR-ja ALK-geenien somaattiset mutaatiot liittyvät usein NSCLC: hen., EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) on luokan tyrosiini kinaasi-reseptoreihin, joiden toiminta on vapautettu eri tyyppisiä epiteelin kasvaimia (mukaan lukien keuhkosyöpä), koska niillä on tärkeä rooli syöpäsolujen lisääntymistä, angiogeneesiä ja etäpesäke. Tästä syystä potilaiden hoidossa käytetään yleisesti erilaisia strategioita, joilla puututaan EGFR-toimintaan. Näiden reseptorien tyrosiinikinaasiaktiivisuuden estäjiä (esim.erlotinibi, gefitinibi) käytetään laajalti kliinisissä ei-pienisoluisen keuhkosyövän hoidoissa., Valitettavasti EGFR: n toimintahäiriön taustalla olevien geneettisten mutaatioiden vuoksi jotkut potilaat eivät ole herkkiä tämäntyyppiselle hoidolle. Eri ryhmien potilaat voivat todellakin erottuvat toisistaan tyypin perusteella muutos kuljettaa EGFR, kuten geenin monistuma, poistetaan tai yhden nukleotidin muutokset, jotka voivat muuttaa sen toimintaa eri tavoin (eli ei kautta tyrosiinikinaasin domain). Tämän seurauksena EGFR-kopioi numero määräytyy KALA on yksi biomarkkereita käytetään valita oikea hoito.,
kalaa käytetään yleisesti alk-geenin inversioiden tai translokaatioiden havaitsemiseen. ALK-geeni sijaitsee kromosomi 2: n (2p23) lyhyellä haaralla ja koodaa transmembraanityrosiinikinaasireseptoria. ALK: tä ei saa ilmaista aikuisen keuhkoissa. Patologisissa olosuhteissa ALK-geeni kuitenkin hajoaa ja sulauttaa sen 3′: n (joka sisältää tyrosiinikinaasin domeenin) muiden geenien 5′: n kanssa. Tämä tapahtuma voi johtaa ALK-signalointireittien hallitsemattomaan aktivoitumiseen. Yleisin fuusio tapahtuu EML4, koska inversio lyhyen käsivarteen kromosomi 2.,
kala on FDA: n hyväksymä menetelmä inversioiden tai translokaatioiden havaitsemiseksi ALK-geenissä. Tyypillisesti anturit kohdistaminen 3′ ja 5′ – alueella geeni on merkitty eri fluorophores: negatiivinen ytimet, värit näkyvät lähellä toisiaan (usein päällekkäin), kun taas syöpäsoluissa signaalit on jaettu toisistaan seurauksena kromosomi uudelleenjärjestelyt (Kuva 4).
Kuva 3: Edustaja näkymä ALK-geenin translokaatio havaita KALOJA., 5′ ja 3′ alueet geenin visualisoidaan vihreä ja punainen fluoresenssi vastaavasti. A. villityypin ydin. B. syöpäsolujen Tuma, joka osoittaa tyypilliset luotaimet jakautuvat. C. syöpäsolujen Tuma, joka osoittaa tyypilliset luotaimet jakautuvat. Kolmannella luotaimella voidaan määritellä kromosomien uudelleenjärjestely, joka todellisuudessa tapahtuu.
kolmas anturi kohdistaminen potentiaalisille ALK kumppani voisi entisestään vahvistaa ja määritellä kromosomi uudelleenjärjestelyt tapahtuvat potilaan (Kuva 4C)., Keuhkojen syövät kätkeminen mutaatiot johtavat ALK hyperactivation voidaan hoitaa ALK estäjien, kuten Crizotinib.
KALA Rintasyövän
Tämä on yleisin maligniteetti naisilla ja toiseksi yleisin syy syöpään liittyvät kuolemaan maailmanlaajuisesti. Rintasyöpä on usein ominaista poikkeavuuksia reseptorin tila, mikä säätelyä solujen transduktio väyliä vastuussa solujen lisääntymistä ja selviytymistä. Erityisesti noin 20-30% rintasyöpäkasvaimista tiedetään yliekspressoivan EGFR-perheeseen kuuluvaa HER2/Neu: ta., Yleinen hoito näissä tapauksissa on trastutsumabi, humanisoitu monoklonaalinen vasta-aine, jonka FDA hyväksyi vuonna 1998 rintasyövän hoitoon. Sen tarkkaa molekyylitason mekanismia vielä tunneta, mutta tämä vasta-aine todennäköisesti estää HER2-aktivointi sitoutumalla sen solunulkoinen verkkotunnuksen. Lisäksi se näyttää aiheuttavan kasvain solun lysis stimuloiva vasta-riippuvainen matkapuhelinverkon sytotoksisuus (ADCC). KALA, käyttäen asianmukaista koetin vastaan HER2, voidaan käyttää tunnistamaan ylimääräisiä kopioita geeni, merkki siitä, että se on todennäköisemmin vastata trastutsumabihoitoa.,
Kuva 4: Edustajan mielestä mahdollinen rintasyöpä soluja. HER2-signaali on edustettuna punainen; sentromeeri 17-anturi (vihreä) voidaan luetella kromosomi numero. A. HER2-vahvistamaton rintasyöpä: kaksi centromeres 17 ja kaksi kopiota HER2-geenistä odotetusti. B. HER2-monistettu rintasyöpä useita havainto HER2.
KALA Virtsarakon Syöpä
Se on viidenneksi yleisin ihmisen maligniteetti ja toiseksi yleisimmin diagnosoitu urogenitaalinen jälkeen kasvain eturauhasen syöpä., Se on polygeeninen sairaus, mikä tarkoittaa, että se on ollut liittyy useita geneettisiä poikkeavuuksia, kuten mutaatioita FGFR3, RB1, HRAS, TP53 tai TSC1 geenit. Alkutapahtuma on kuitenkin todennäköisesti mutaatio 9p21-alueella, joka sisältää p16 / CDKN2A-geenin. Lisäksi virtsarakon syöpäsoluille on ominaista lisääntynyt kromosomin epävakaus (CIN). Huonosti kromosomi päällekkäisyyksiä tai erottelua mitoosin aikana aiheuttaa DNA: n uudelleenjärjestelyt ja translokaatioita, voitto tai tappio koko kromosomit (aneuploidia) tai kromosomi palasia., Tuloksena oleva geneettisen materiaalin epätasapaino pahenee jokaisen solusyklin jälkeen. Seurauksena genomista kuvioita voi olla liittyvät eri vaiheissa kasvaimen kehitystä, jossa on enemmän invasiivisia muotoja näyttää suurempi määrä sytogeneettisiä muutoksia.
virtsarakon syöpäsoluissa havaittuja numeerisia ja rakenteellisia kromosomimuutoksia voidaan käyttää kasvainmarkkereina.
Erityisesti samanaikainen havaitseminen kopioi numero vaihtelu kromosomien 3, 7, 17 ja poistetaan 9p21 alueen (sisältää p16), joita KALAT käyttävät neljä eri anturit on yleinen käytäntö., Tämä menetelmä on hyödyllinen annettaessa tietoa syövän etenemisestä ja uusiutumisesta.
KALA Krooninen Lymfaattinen Leukemia (KLL)
Analyysi hematologisten maligniteettien on yksi tyypillisiä esimerkkejä eduista KALAN näytteiden analysointi ominaista vaihteleva karyotyyppi ja alhainen mitoosi toimintaa. CLL on yleisin leukemia aikuisilla. Siihen ei ole liittynyt erityistä toistuvaa geenimuutosta., Sen sijaan, samanlainen virtsarakon syöpä, paneeli eri mutaatiot on yhdistetty eri vaikeusasteiden tauti ja käytetään ennustavan indikaattorit potilaan kliinisen. Kalapaneeleissa on usein luotaimia trisomia 12 ja poistoja 11Q, 13Q ja 17P., Poistetaan 11q, joka useimmissa tapauksissa liittyy ATM-geenin, on todettu potilailla, osoittaa nopeaa etenemistä syöpä; trisomia 12 liittyy pitkälle edennyt tauti, resistenssi kemoterapia ja lyhyempi elinaika; poistetaan 13q on yleisimmin löydetty ja on yleensä liittyy enemmän suotuisa ennuste; poistetaan 17p sisältää usein poistetaan TP53-geenin ja vastaa pitkälle kasvain, huono pysyvyys.
Enzo Life Sciences on DNA-ja RNA-merkintäteknologioiden globaali johtaja., Tarjoamme valikoiman tuotteita genomiikan ja syöpätutkimuksen tarpeisiin. Yksinkertainen ja tehokas menetelmä tuottaa merkitty DNA, tutustu Nick käännös DNA labeling kit sekä luettelo meidän SEEBRIGHT® fluoresoiva väriaine-dUTPs ja meidän Allyyliamiinin-dUTP. Etkö ole varma, käytetäänkö Ish-luotaimen merkintöihin biotiinia vai digoksigeniiniä? Voimme auttaa sinua siellä! Älä unohda tarkistaa Enzo spectra katsoja eksitaatio-ja emissioaallonpituus profiilit yhteisiä väriaineita ja muita fluoresenssi solupohjaiset määritykset., Kun olet sitä, tutustu TechNote on hyviä ja huonoja puolia KALA, aCGH, ja NGS ja Miten käyttää allyyliamiinin-dUTP FISH DNA-koetin merkintöjä. Kaikkiin tuotteisiin liittyviin kysymyksiin ja huolenaiheisiin tekninen tukitiimimme on täällä auttamassa.