flowcytometri vs. FACS: Hvad er Forskellen?
flowcytometri og FACS (fluorescens-aktiveret celle sortering) er tydeligt forskellige procedurer selvom FACS er en efterkommer procedure, baseret på flow-cytometri protokoller. Fremskridt inden for cellesorteringsteknologi bidrager på en stor måde til det molekylære videnskabslandskab., Det samlede bidrag fra det, der læres, er det, der styrer den farmaceutiske opdagelsesproces i både en diagnostisk kapacitet og også terapeutiske bestræbelser, hvilket igen fører til forbedrede patientudfald1.
Hvad er Flo ?cytometri?Flo flowcytometri er en metode, der bruges til at undersøge og bestemme ekspressionen af intracellulære molekyler og celleoverfladen og til at definere og karakterisere forskellige enkeltcelletyper. Det bruges også til bestemmelse af cellevolumen, cellestørrelse og evaluering af renheden af subpopulationer, der er isoleret., Dette tillader multi-parameter evaluering af individuelle celler på omtrent samme tid.
en Flo .cytometri er et kraftfuldt instrument, fordi det tillader samtidig analyse af både fysiske og kemiske egenskaber på op til tusinder af partikler pr. Dette gør det til en hurtig og kvantitativ metode til analyse og oprensning i cellesuspension. Ved hjælp af Flo.kan vi bestemme fænotypen og funktionen og endda sortere levende celler., jeg
Nogle af de måling applikationer, taget via flowcytometri er:
- trombocytfunktionen
- knoglemarv
- Perifert blod
De to potentielle flow-cytometri data udtryk formater inkluderer:
- histogrammer, der måler eller undersøg kun en enkelt parameter,
- dot-plots, der sammenligner 2 eller 3 parametre samtidigt på en to – eller tre-dimensional scatter-plot.
Hvad er FACS?,
FACS er en forkortelse for fluorescens-aktiveret enkelt celle sortering, hvilket er en flowcytometrisk teknik, der yderligere tilføjer en grad af funktionalitet. Ved at udnytte meget specifikke antistoffer, der er mærket med fluorescerende konjugater (et fluorescerende molekyle kaldet fluorochrom), FACS-analyse giver os mulighed for samtidig indsamle data på, og sortere i en biologisk prøve med et næsten ubegrænset antal forskellige parametre. Ligesom i konventionel Flo .cytometri indsamles fremad-scatter, side-scatter og fluorescerende signaldata.,i
Ved hjælp af en Flo .cytometer-maskine ledes celler eller andre partikler, der er suspenderet i en væskestrøm, gennem en laserstråle på en enkelt fil, og interaktion med laserlyset måles ved hjælp af et elektronisk lysdetektorapparat som lysspredning og fluorescensintensitet. Hvis en fluorescerende markør er bundet til en cellulær komponent, vil fluorescensintensiteten ideelt repræsentere mængden af den pågældende strømningscellekomponent.
Cellesortering via avanceret cellesorteringsinstrumentering udføres med høj specificitet og høje standarder., Forskere kan lide at bruge Flo .cytometri-metoderne, fordi det er den hurtigste og mest effektive måde at anvende måling på hele celleprocessen. Operatøren forudbestemmer eller vælger visse parametre for, hvordan celler skal sorteres. i
på dette tidspunkt pålægger cellesorteringsmaskinen en elektrisk ladning på hver celle, så celler sorteres efter ladning (ved hjælp af elektromagneter) i separate kar, når de forlader strømningskammeret. Teknologien til fysisk at sortere en heterogen blanding af celler i forskellige populationer er nyttig til mange terapeutiske og kliniske anvendelser.,
at Forstå Forholdet Mellem FACS og flowcytometri
for At sætte det forholdet mellem FACS analyse og flowcytometri simpel sammenhæng, de er dybest set partnere i cellen analyse processen. FACS bruges som en cellesorter og beriges til en delmængde af celler, som ofte derefter studeres nærmere ved hjælp af Flo .cytometri eller andre analytiske teknikker2.
Flo .cytometri anvendes til celleanalyse og er fokuseret på at måle proteinekspression eller co-ekspression inden for en blandet population af celler., Både Flo .cytometri og FACS er udviklet til at differentiere celler i henhold til deres optiske filtre.
nøgleforskellen mellem de to cellekarakteriseringsmetoder ligger i funktionaliteten af den anvendte metode.
både Flo .cytometri og FACS har tendens til at blive brugt om hverandre. De er begge udviklet til at differentiere celler i henhold til deres optiske egenskaber. Der er dog nogle forskelle i metodologi, der er forskellige og har forskellige proceduremæssige resultater., Brugt entydigt resultaterne er ensidige, og bruges sammen, resultaterne er udtryk data fra flere celleparametre3.
–FACS er en proces, hvorved en prøveblanding af celler sorteres efter deres lyssprednings-og fluorescensegenskaber i to eller flere beholdere.
–Flo .cytometri er en metode, der anvendes under analyse af en heterogen population af celler ifølge forskellige celleoverflademolekyler, størrelse og volumen, som tillader undersøgelse af individuelle celler.,
-FACS sammen med flowcytometri kan måle og karakterisere flere celle generationer ved at bruge meget specifikke antistoffer, der er mærket med fluorescerende farvestoffer, en forsker kan udføre FACS analyse og samtidigt samle udtryk data og sortere celle prøver ved en række variabler.
hvordan Flo .cytometri og FACS anvendes i kliniske applikationer
Immunophenotyping: et af de mest almindelige applikationsformater, der anvendes, er immunophenotyping. Dette er en metode, der identificerer og kvantificerer flere populationer af celler i en heterogen prøve., Dette omfatter perifert blod, knoglemarv, og lymfe materiale. Immunofænotypebestemmelse primært anvendes i hematological indstillinger til at diagnosticere visse kræftformer, dvs malignt lymfom og/eller leukemia4.
Cellesortering: fremskridt i cellesorterere er rettet mod den blide isolering af celler i separate rør. Specialiserede Flo .målere med evnen til at forhøre og karakterisere hver celle, når den passerer gennem laseren og udtrykker vigtige måledata for cellen., Nøglen her måles også i kvantitativ forstand-instrumenteringen er i stand til at håndtere store volumener, der gør mikroskopisk undersøgelse forældet.
Cellecyklusanalyse: med Flo .cytometri og FACS kan cellen analyseres og måles i alle fire forskellige faser af hele cellecyklussen. De cellebaserede assays kan derefter hjælpe med bestemmelsen af celleanomalier ved hjælp af visse fluorescerende farvestoffer. Feltet af enkeltcelle genomics anvender begge disse metoder til at studere en enkelt celletype for en cellepopulation.,
apoptose: apoptose eller programmeret celledød er en normal del af eukaryote cellers livscyklus. Celler dør af forskellige årsager: gennem nekrose, fremkaldt af eksterne fysiske og kemiske ændringer i cellen eller gennem apoptose, en proces, hvor celler indleder et “selvmord” – program gennem internt kontrollerede faktorer. Disse to forskellige typer celledød, apoptose og nekrose, kan identificeres via Flo .cytometrisk metode og bruges til at bestemme morfologiske, biokemiske og molekylære ændringer, der forekommer i døende celler.,
Celleproliferationsassays: cellebaserede assays er et af de vigtigste værktøjer til at måle virkningsmekanismen på visse stimuli, såsom vækstfaktorer, cytokiner og andre mediekomponenter. Flowcytometeret kan måle udbredelsen af mærkning hvilende celler med en celle membran, fluorescerende farvestof, carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE). Når cellerne aktiveres, begynder de at proliferere og gennemgå mitose. Når cellerne deler sig, overføres halvdelen af det originale farvestof til hver dattercelle., Ved at måle reduktionen af fluorescenssignalet kan forskere beregne cellulær aktivering og proliferation.
intracellulær Calciumflu.: celler interagerer commingle i deres miljø gennem signaltransduktionsveje. Når disse veje aktiveres, pumper membranbundne calciumionkanaler calcium ind i cellen og øger hurtigt den intracellulære calciumkoncentration. De højere calciumniveauer giver cellen energi til at reagere. Flo .cytometeret er i stand til at detektere Flu .en af calcium ind i cellen og give detaljerede måledata5.,
indpakning af
udvidelsen af Flo .cytometriske teknikker til evaluering af intracellulære egenskaber bevæger denne platform ind i arenaen til bestemmelse af cellefunktion. Disse nyere tilgange udvider nytten af Flo .cytometri som et værdifuldt redskab til en dybere forståelse af immunfunktionen og visse cellers rolle, da det begynder at afsløre indikatorer for apoptose., Ved at forbedre opkaldets levedygtighed gennem forbedret teknologi og genkende celledød eller apoptose tjener teknologien til at hjælpe forskere med at forstå, hvorfor det sker, og de biokemiske ændringer, der forekommer specifikke for hver fase af celleaktivitet. Kortlægning af signalveje og DNA-fragmentering er en teknik, som molekylærgenetikere finder meget værdifuld. mRNA baserede terapeutiske løsninger synes at være nøglen til at løse nogle af de gåder, der er forbundet med systemisk sygdom6.,
Når vi bevæger os tættere på at kunne udnytte celleanalyseprocessen via 3D-teknologi, er det let at se, hvordan den opnåede viden vil føre til større innovation. Forskersamfundet ser frem til at strække tæppet af molekylærvidenskab til at omfatte stamcelleteknologi. Med stamceller og evnen til at klone dem effektivt og introducere dem til kroppen for at skabe systemændring er, hvor fremtiden går., Vi kan se, hvordan flowcytometri og den anden metode af FACS i sidste ende vil resultere i mere positive behandlingsresultater, terapeutiske interventioner, og måske en dag fuldstændig lysis af ondartede tumorer. Genetisk sygdom er hurtigt ved at blive afsløret, og visningen af mange nye opdagelser har startet en ny bevægelse af biologisk og molekylær videnskab7.
kilder:
2 2https:/ / w…sciencedirect.,com/science/article/abs/pii/0022175981902532
3 https://sciencing.com/understand-flow-cytometry-results-5805206.html
4 https://www.cancer.gov/publications/dictionaries/cancer-terms/def/immunophenotyping
5 https://journals.sagepub.com/doi/abs/10.1177/1087057104264038
6 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4623474/
7 https://www.nature.com/scitable/topicpage/cdk-14046166/