Abstrakt
der findes ikke megen information om foreningen af anti-SSA/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21 med systemisk lupus erytematosus (SLE) funktioner. I dette arbejde analyserede vi foreningerne mellem både anti-Ro-reaktivitet og kliniske og immunologiske manifestationer hos 141 SLE-patienter. Lysfølsomhed og photoserophtalmia/Roerostomia viste sig at være positivt forbundet med både anti-SSA / Ro60 ( og , resp.) og anti-Ro52 / TRIM21 (og, hhv.)., I modsætning hertil blev der påvist en negativ sammenhæng med hensyn til anti-phospholipidantistoffer, anti-SSA/Ro60, der havde en stærkere virkning () end anti-Ro52 / TRIM21. Anti-SSA/Ro60 viste en særlig positiv association med hypocomplementemia (), hovedsageligt med lave C4 niveauer (), der henviser til, at anti-Ro52/TRIM21 blev fundet at være positivt associeret med raynauds fænomen () og cytopenia (), og negativt forbundet med anti-dsDNA (). Lymfocytter er involveret i forholdet mellem anti-Ro52/TRIM21 og cytopeni, da positive patienter viste lavere celleniveauer end negative patienter ()., Afslutningsvis viste anti-ssa/Ro60 og anti-Ro52 / TRIM21 både almindelige og specifikke foreninger i SLE. Disse data øger således bevis for de forskellige foreninger af de to anti-Ro-specificiteter, selv i en bestemt sygdom.
1. Indledning
Anti-SSA/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21 er blandt de mest almindeligt opdaget autoantistoffer i den rutinemæssige screening for systemiske autoimmune sygdomme., Selv om både antistof reactivities blev anset for at udgøre en del af den anti-Ro-systemet i lang tid, nu er det klart fastslået, at deres antigener er forskellige, ikke udgør en del af en stabil makromolekylære kompleks, og er placeret i forskellige cellulære rum (revideret ). Desuden anti-SSA/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21 antistoffer har også været forbundet med et andet mønster af kliniske manifestationer., Tilstedeværelsen anti-SSA/Ro60 er således relateret til autoimmune processer, hovedsageligt systemisk lupus erythematosus (SLE) og Sjggrens syndrom (SS), mens anti-Ro52 / TRIM21 viser et bredere spektrum af sygdomsforeninger . De vigtigste kliniske autoimmune enheder, der er forbundet med anti-Ro52/TRIM21 er SS, systemisk sklerose (SSc), lever af autoimmune sygdomme, og, specielt, myositis, hvor det har været betragtet som en selvstændig markør . Desuden er anti-Ro52 / TRIM21 blevet påvist i nonautoimmune tilstande såsom infektioner og neoplastiske sygdomme ., Desuden er der også rapporteret forskellige foreninger med specifikke kliniske manifestationer, især for anti-Ro52 / TRIM21. Faktisk er denne anti-Ro-reaktivitet stærkt forbundet med medfødt hjerteblok i neonatal lupus og med interstitiel lungesygdom . Anti-Ro52 / TRIM21 har også været relateret til en mere alvorlig sygdom i SS, myositis, primær galde cirrhose og autoimmun hepatitis .
blandt systemiske autoimmune sygdomme viser SLE et specifikt anti-Ro-antistofmønster., Selvom samtidig reaktivitet er det hyppigere antistofmønster, viser denne sygdom den højeste forekomst af isoleret anti-ssa/Ro60 . I SLE har antistoffer mod Ro-systemet historisk været forbundet med lysfølsomhed, men der findes kun lidt information om sammenhængen mellem begge anti-Ro-reaktivitet og andre kliniske manifestationer ., Derfor var formålet med dette arbejde med denne baggrund at analysere, om anti-ssa/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21 antistoffer er differentielt forbundet med de kliniske klassificeringskriterier og andre hyppige manifestationer af SLE.
2. Patienter og metoder
2, 1. Patienter, Sera Udvalg, og Analyseret Funktioner
Sera fra 141 SLE-patienter (131 kvinder, gennemsnitsalderen ved diagnose 36.7 ± 14.5 år), der opfyldte American College of Rheumatology (ACR) kriterier blev udvalgt til denne undersøgelse ., Disse patienter blev fulgt op på Internal Medicine autoimmun Disease Unit, Hospital Universitario Central de Asturias, og deres kliniske og immunologiske egenskaber blev registreret i en database over SLE-patienter etableret i vores region fra 2004, som regelmæssigt opdateres . Funktioner, der er optaget i denne database, omfattede ACR-klassificeringskriterierne og andre relaterede SLE-manifestationer eller immunologiske parametre. I dette arbejde blev alle funktioner undtagen cytopeni kumulativt registreret., Cytopeni blev overvejet ved diagnosen for at undgå påvirkning af behandlingen på de hæmatologiske parametre. Kun de træk, hvis prævalens var højere end 10%, blev statistisk analyseret. Især var funktionerne i analysen ACR-klassificeringskriterierne, nonscarring alopeci ,ererophthalmia / .erostomia, Raynauds fænomen og hypocomplementemia. Alle klassificeringskriterier blev defineret som angivet i ACR-kriterierne fra 1996 med undtagelse af neurologiske lidelser., I denne SLE-manifestation blev organisk hjernesyndrom, synsforstyrrelser og perifer og kranial nervesygdom også betragtet ved siden af anfald og psykose. Hypocomplementemia var defineret som havende lav C3 og/eller C4 niveauer (<0,8 mg/dL og <0,15 mg/dL, resp.).
Sera svarende til forskellige patients revisioner blev indsamlet og opbevaret ved -20 C. C. Det sidste serum fra hver patient blev valgt til undersøgelsen (indsamlingsperiode fra februar 2007 til marts 2011). Den gennemsnitlige alder på tidspunktet for analysen var år.
2.2., Bestemmelse af Autoantistoffer, Supplere, og Hæmatologiske Parametre
Bestemmelse af anti-SSA/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21 antistoffer i 141 valgte SLE-patienter blev udført af fluor enzym immunoassay (Thermo Fisher Scientific-Phadia GmbH, Freiburg, Tyskland). Assayet blev udført på en automatiseret ImmunoCAP 250-analysator. I alle patienter, andre SLE ANA særlige forhold (anti-dsDNA, SS-B/La, U1RNP, og Sm) og anticardiolipin (CL) IgG og IgM antistoffer var også samtidig bestemmes med samme metode., C3-og C4-niveauerne blev målt ved nephelometri (Beckman Coulter Inc ., Californien, USA).
Niveauer af haematologic parametre, kvantificeres ved hjælp af en Advia 2120 analyzer (Siemens Healthcare, Erlangen, Tyskland), der var tilgængelige på det tidspunkt, autoantibody bestemmelse i 128 patienter (119 hunner; gennemsnitsalderen ved diagnose og ved analyse og år, hhv.). Leukopeni, lymphopenia, og trombocytopeni blev betragtet i henhold til ACR kriterier (<4.00 × 103/µL, <1.50 x 103/µL, og <100.00 × 103/µL, resp.,) og anæmi blev defineret af en hæmoglobin koncentration af <11.0 mg/dL hos kvinder og <fra 12,0 mg/dL hos mænd.
2, 3. Statistisk Analyse
foreningen af tilstedeværelsen af anti-SSA/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21 med SLE manifestationer blev analyseret af binær logistisk regression, justeret for køn og alder ved diagnose og på tidspunktet for analysen., Tidligere blev tilstedeværelsen af både anti-Ro-specificiteter og af anti-dsDNA, SSB/La, RNP, Sm og CL-antistoffer samtidig analyseret ved fremad trinvis logistisk regressionsprocedure for at vise dens indflydelse på hver klinisk manifestation og immunologisk parameter. Når det var relevant, blev andre autoantistoffer, der viste sig at være statistisk indflydelsesrige, inkluderet i den binære logistiske regressionsanalyse af anti-SSA/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21 foreninger. I denne analyse blev begge anti-Ro-reaktiviteter først inkluderet sammen som uafhængige variabler., For at undgå multikollinearitetseffekter forårsaget af det tætte forhold, der eksisterede mellem begge specificiteter, blev der udført en antistof-separat analyse, når der blev fundet en ikke statistisk signifikant tilknytning. Odds ratio (OR) og deres 95% konfidensinterval (CI) blev beregnet. Niveauer af komplementære og hæmatologiske parametre blev sammenlignet med studerendes eller Mann-Mannhitney-test i henhold til datadistribution. Resultaterne blev betragtet som statistisk signifikante, når værdien var <0, 05. Statistisk analyse blev udført under anvendelse af SPSS 15.,0 statistisk soft .arepakke (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
3. Resultater
3.1. Forekomsten af Anti-SSA/Ro60 og Anti-Ro52/TRIM21 i SLE-Patienter
tilstedeværelsen af anti-SSA/Ro60 og/eller anti-Ro52/TRIM21 antistoffer, der blev fundet i 62 ud af de 141 SLE-patienter analyseret (44.0%). Samtidig reaktivitet var det vigtigste observerede antistofmønster, idet 37 patienter var positive for begge antistoffer (26, 2%). Anti-SSA/Ro60 alene var til stede i 23 (16.3%), mens den isolerede anti-Ro52/TRIM21 reaktivitet blev kun fundet i to patienter (1,4 pct.)., Således antistof mønster i dette patienter’ – serien blev efter aftale med den etablerede forholdet mellem anti-SSA/Ro60 og SLE-og det var ikke forbundet med nogen alder ved diagnose eller køn prævalens (Tabel 1).
3, 2. Sammenslutninger af Anti-SSA/Ro60 og Anti-Ro52/TRIM21 med Kliniske Manifestationer i SLE
Når anti-SSA/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21 var samtidig indgå som uafhængige variable i regressionsanalyse, den eneste signifikante association fandt, var cytopenia med anti-Ro52/TRIM21 (Tabel 2)., På grund af dette fund, vi har desuden analyseret forholdet mellem disse autoantistoffer, og de forskellige typer af haematologic ACR kriterier, og en tendens i retning af en associering mellem anti-Ro52/TRIM21 og leukopeni/lymphopenia blev observeret (Tabel 2). Trombocytopeni kan ikke blive analyseret, da alle trombocytopenisk patienter med anti-Ro-antistoffer, der var positive for både særlige forhold (4 af 4) hverken var hæmolytisk anæmi analyseret på grund af det lave antal patienter (kun fem) med dette blod lidelse.,
På samme måde som cytopeni viste det sig, at orale sår og Raynauds fænomen også var positivt, skønt ikke signifikant, forbundet med anti-Ro52 / TRIM21 (tabel 2). Når anti-Ro52/TRIM21 blev analyseret separat uden, herunder anti-SSA/Ro60 som andre uafhængige variable, alene foreningen med raynauds fænomen blev statistisk signifikant (ELLER 2.46, CI 95% 1.11–5.43, ).
Ingen af de resterende kliniske manifestationer, viste en signifikant sammenhæng med anti-SSA/Ro60 og/eller anti-Ro52/TRIM21 om både antistoffer blev samtidigt eller separat analyseret.,
3.3. Sammenslutninger af Anti-SSA/Ro60 og Anti-Ro52/TRIM21 med Immunologiske Parametre i SLE
Anti-SSA/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21 viste også en anden forening, med SLE – relaterede immunologiske parametre. Faktisk, når de to anti-Ro reactivities blev behandlet sammen som uafhængige variabler, en modsat adfærd blev observeret i forbindelse med tilstedeværelsen af anti-dsDNA antistoffer og hypocomplementemia, anti-SSA/Ro60 at være positivt forbundet og anti-Ro52/TRIM21 negativt forbundet (Tabel 3)., Ikke desto mindre er det kun foreninger, der findes at være statistisk signifikant, blev den negative forhold mellem anti-Ro52/TRIM21 og anti-dsDNA antistoffer og positivt mellem anti-SSA/Ro60, og hypocomplementemia. Både lave C3-og C4-niveauer viste sig at være positivt forbundet med anti-ssa/Ro60, men kun forbindelsen med C4 var statistisk signifikant. Endvidere var niveauerne af denne komplementfraktion, men ikke niveauerne af C3, også signifikant lavere hos anti-SSA/Ro60 positive patienter end hos negative patienter på tidspunktet for autoantistofbestemmelse (0, 16 0 0.,06 mg / dL versus mg/dL, og mg/dL versus mg / dL, hhv., C4 og C3).
på den anden side viste det sig, at antiphospholipidantistoffer var negativt forbundet med anti-SSA / Ro60 (tabel 3). Selv om både anti-Ro positive grupper viste et lignende fald i andelen af patienter med fosfolipidantistoffer, ELLER der er opnået i den anti-Ro52/TRIM21 gruppe var næsten 1 (0.97), der henviser til, at den, der svarer til den gruppe af anti-SSA/Ro60 positive patienter var 0.33., Denne konstatering afspejlede sandsynligvis en stærkere involvering af den sameksisterende anti-ssa/Ro60-reaktivitet i det negative forhold til antiphospholipidantistoffer. I virkeligheden, en negativ statistisk signifikant sammenhæng blev kun fundet for anti-SSA/Ro60 i den særskilte analyse af både særlige forhold (ELLER 0.32, CI 95% 0.13–0.79, og ELLER 0.42, CI 95% 0.15–1.20, for anti-SSA/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21 resp.). Blandt de analyserede antiphospholipidantistoffer var anti-cl IgG/IgM og lupus antikoagulant (LA) dem, der viste sig at være mest involveret i dette negative forhold (tabel 3)., I overensstemmelse med, hvad der er konstateret ved analyse af hele antiphospholipid gruppesex, kun anti-SSA/Ro60 blev fundet til at være statistisk signifikant forbundet med anti-CL-IgG/IgM, når de to anti-Ro-antistoffer blev analyseret separat (ELLER 0.29, CI 95% 0.09–0.92, og ELLER 0.28, CI 95% 0.06–1.27, for anti-SSA/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21 resp.). Forbindelsen med LA blev ikke statistisk analyseret på grund af det meget lave antal positive patienter med anti-SS-Ro60 (2 patienter) eller Ro52/TRIM21 antistoffer (kun 1 patient).,
Anti-SM var den eneste analyserede immunologiske parameter, der ikke blev fundet forbundet med enten anti-SSA/Ro60 eller anti-Ro52 / TRIM21 (tabel 3).
3.4. Differential Association for Anti-SSA/Ro60 og Anti-Ro52/TRIM21 med Hæmatologiske Parametre
for at bekræfte den tidligere observerede association mellem anti-Ro52/TRIM21 og cytopenia, vi har sammenlignet de niveauer af hæmatologiske parametre på tidspunktet for analysen i 128 SLE-patienter på grund af deres anti-Ro52/TRIM21 status (Tabel 4). Ud af disse patienter blev 110 (86, 6%) behandlet med antimalarialer, 48 (37.,8%) med kortikosteroider, og 30 (23.6%) med immunsupprimerende lægemidler (azathioprin, methotrexat, eller mycophenolat mofetil). Ingen fik biologisk terapi. Gennemsnitlige leukocytniveauer viste sig at være signifikant lavere i gruppen af patienter med anti-Ro52/TRIM21 antistoffer (). Denne effekt blev hovedsageligt udøvet på lymfocytter, da anti-Ro52/TRIM21 positive patienter viste signifikant lavere lymfocytniveauer end negative patienter ()., Desuden sammenhængen mellem anti-Ro52/TRIM21 og lymphopenia blev yderligere bekræftet af logistisk regression, justeret for køn, alder, og behandling på tidspunktet for analysen (ELLER 2.72, 95% CI 1.08–6.88, ).
i modsætning hertil viste niveauerne af hæmatologiske parametre en anden adfærd ved overvejelse af anti-SSA / Ro60 (tabel 5). Der blev faktisk ikke fundet statistisk signifikante forskelle med hensyn til nogen leukocytpopulation, hvorimod anti-ssa/Ro60 positive patienter havde signifikant lavere hæmoglobinniveauer end negative patienter ()., På trods af denne signifikante forskel lå det gennemsnitlige hæmoglobinniveau hos positive patienter inden for normalområdet. På den anden side var blodpladeniveauerne næsten signifikant højere hos anti-SSA/Ro60 positive patienter end hos negative patienter (). Denne konstatering kunne påvirkes af den negative sammenhæng, der findes af os mellem denne anti-Ro-specificitet og anti-cl IgG/IgM-antistoffer, som igen er kendt for at mindske blodpladeniveauerne. Ja, positive patienter i anti-CL-IgG/IgM viste en tendens til at have lavere blodplader end negative patienter (209.8 ± 69.3 × 103/µL versus 241.1 ± 69.,6 103 103 / µL, hhv.).
4. Diskussion
I dette arbejde, anti-SSA/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21 har vist sig at vise et andet mønster af kliniske og immunologiske foreninger i SLE. I henhold til tidligere beskrevet forholdet mellem anti-SSA/Ro60 og SLE , denne anti-Ro specificitet blev fundet at være positivt associeret med hypocomplementemia, en SLE – relaterede immunologiske funktion., På den anden side blev der observeret en negativ sammenhæng mellem anti-Ro52/TRIM21 og anti-dsDNA, hvilket er i overensstemmelse med den højere forekomst af dette antistof under andre autoimmune tilstande, såsom SS, myositis, SSc og leversygdomme .
begge anti-Ro-aktiviteter udviste også forskellig adfærd med hensyn til hæmatologiske abnormiteter. Således, anti-Ro52/TRIM21 blev fundet at være signifikant associeret med lymphopenia, uafhængigt af den terapeutiske regime, der henviser til, at patienter med anti-SSA/Ro60 antistoffer viste en højere blod-numre og lavere hæmoglobin niveau end negative patienter., Lymfopeni har tidligere været relateret til tilstedeværelsen af anti-Ro antistoffer i SLE og SS . Vores resultater understøtter det specifikke forhold mellem anti-Ro52 / TRIM21 og lymfopeni i SLE beskrevet i tidligere værker . Blandt de forskellige lymfocyt delmængder, beviser, at CD4+ og NK-celler, der er involveret i lymphopenia i forbindelse med anti-Ro-eller specifikt med anti-Ro52/TRIM21 ., Ro52 / TRIM21-antigenet er et cytoplasmatisk protein, der kan induceres og omfordeles til kernen eller celleoverfladen af flere stress-og proinflammatoriske stimuli, såsom type i og II IFNs, i forskellige celletyper inklusive lymfocytter . Interessant nok har ro52 / TRIM21-ekspression vist sig at være opreguleret i perifere blodmononukleære celler fra SLE-og SS-patienter ., Det er fristende at spekulere i, at et proinflammatorisk miljø, der er karakteristisk for systemiske autoimmune sygdomme, kunne inducere ekspressionen af Ro52/TRIM21 på lymfocytoverfladen, hvilket tillader binding af specifikke antistoffer, der endelig ville forårsage celledød. I denne henseende er det blevet beskrevet, at autolog sera indeholdende anti-Ro øger celledød ved apoptose i SLE-lymfocytkulturer .
Anti-Ro-antistoffer har tidligere vist sig at være forbundet med en lavere forekomst af trombocytopeni hos SLE-patienter ., En mulig rolle for anti-ssa/Ro60-reaktiviteten i denne negative forening understøttes af tendensen mod højere niveauer af blodpladeniveauer hos anti-ssa/Ro60 positive patienter end hos negative patienter observeret af os. Ikke desto mindre antyder vores data, at denne beskyttende virkning ville være indirekte og omvendt afhængig af antiphospholipidantistofstatus. I virkeligheden, vi har fundet, at anti-SSA/Ro60 var negativt forbundet med antiphospholipid og anti-CL-IgG/IgM antistoffer, som, igen, er blevet relateret til den lave blodplader ., Vores data understøtter også en højere involvering af anti-SSA/Ro60-specificiteten i den tidligere påpegede negative sammenslutning af anti-Ro med anti-CL-antistoffer . Endelig er den observerede negative effekt af anti-ssa / Ro60 på hæmoglobinniveauet ikke tilstrækkelig til at blive betragtet som anæmi. Alle disse fund antyder således, at anti-SSA/Ro60 ikke har nogen patologisk effekt på nogen hæmatologisk population i modsætning til den, der blev observeret for anti-Ro52/TRIM21.,anti-Ro52/TRIM21, men ikke anti-SSA/Ro60, viste sig at være positivt forbundet med Raynauds fænomen. Dette forhold var uafhængigt af tilstedeværelsen af anti-U1RNP, et antistof, der vides at være relateret til Raynauds fænomen, selv i SLE . Antistoffer mod Ro-systemet har også vist sig at være forbundet med Raynauds fænomen i SS ., Støtte den specifikke rolle anti-Ro52 / TRIM21 i denne forbindelse er det interessant at bemærke, at dette antistof er blevet påvist hos cirka 20% af patienterne med SSc, hvor Raynauds fænomen er en kardinal funktion . Desuden blev anti-Ro52/TRIM21 også rapporteret at være det næst mest almindelige autoantistof i en SSc-kohorte .
Lysfølsomhed og xerophthalmia/xerostomi var de eneste funktioner, der findes at være positivt associeret med både anti-SSA/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21., Disse foreninger var kun statistisk signifikante, når begge autoantistoffer blev analyseret separat sandsynligvis på grund af det nære forhold, der eksisterede mellem dem. Selvom antistoffer mod Ro-systemet historisk set er blevet betragtet som forbundet med lysfølsomhed, forbliver dette forhold kontroversielt . Derudover vides der lidt om foreningen med de to forskellige reaktivitet ., Ikke desto mindre er forbedret ekspression af SSA/Ro60 og Ro52/TRIM21 observeret i cytoplasma eller celleoverflade af keratinocytter efter UV-bestråling, hvilket understøtter forholdet mellem lysfølsomhed og reaktivitet over for begge antigener .
På den anden side er sammenhængen mellem .erophthalmia / .erostomia og anti-Ro klart etableret hos SLE-patienter . I lighed med vores fund er der også rapporteret om en tilknytning til enten anti-SSA/Ro60 eller anti-Ro52/TRIM21 ., Disse to Ro-antigener er rapporteret at være udtrykt i celleoverfladen af humane duktale epitelceller under apoptose, hvilket antyder en rolle af denne celledødsmekanisme i induktionen af anti-ssa/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21-responser . Desuden er specifikke anti-ssa/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21 B-celler med et differentierende mønster, der er kompatibelt med plasmaceller, blevet påvist i spytkirtler hos SS-patienter .
5. Konklusioner
Anti-SSA/Ro60 og anti-Ro52/TRIM21 viste et andet mønster af kliniske og immunologiske foreninger i SLE., Ved siden af almindelige positive foreninger med lysfølsomhed ogererophthalmia/.erostomia viste de to anti-Ro-reaktivitet både positive og negative specifikke foreninger. Anti-SSA/Ro60 blev fundet at være positivt associeret med hypocomplementemia men negativt med fosfolipidantistoffer, der henviser til, at anti-Ro52/TRIM21 viste en positiv association med lymphopenia og Raynaud ‘ s fænomen og en negativ sammenhæng med anti-dsDNA antistoffer., Således øger vores data bevis for de forskellige foreninger af begge anti-Ro-specificiteter med specifikke kliniske manifestationer, selv i en enkelt sygdom.
interessekonflikt
forfatterne rapporterer ingen interessekonflikt.
anerkendelser
undersøgelsen modtog ingen økonomisk støtte fra nogen organisation., Forfatterne takker Thermo Fisher Scientific-Phadia GmbH for generøst at give autoantibody kits for den foreliggende undersøgelse, Ana Ynés Martínez Paredes for hende teknisk bistand, og Pablo Martinez Camblor fra den Biomedicinske Undersøgelse Kontor (OIB-FICYT) af Asturien for den statistiske analyse. De er også specielt tak til Dr. Carmen Gutiérrez og Asociación Lúpicos de Asturias for deres opmuntring og støtte. Ivan Cabezas-Rodríguez er støttet af Río Hortega Program, Instituto de Salud Carlos III, Spanien.