Abstrakt
Málo informací existuje o sdružení anti-SSA/Ro60 a anti-Ro52/TRIM21 se systémovým lupus erytematosus (SLE) funkce. V této práci jsme analyzovali asociace obou Anti-Ro reaktivit s klinickými a imunologickými projevy u 141 pacientů SLE. Bylo zjištěno, že fotosenzitivita a xeroftalmie/xerostomie jsou pozitivně spojeny jak s anti-SSA / Ro60(tak s resp.) a anti-Ro52 / TRIM21 ( a, resp.)., Naproti tomu byla zjištěna negativní asociace týkající se Anti-fosfolipidových protilátek, anti-SSA / Ro60 mající silnější účinek () než Anti-Ro52/TRIM21. Anti-SSA/Ro60 ukázal konkrétní pozitivní asociace s hypocomplementemia (), a to především s nízkými C4 úrovní (), vzhledem k tomu, anti-Ro52/TRIM21 bylo zjištěno, že být pozitivně spojena s Raynaudův fenomén () a cytopenie () a negativně spojena s anti-dsDNA (). Lymfocyty se podílejí na vztahu mezi Anti-Ro52 / TRIM21 a cytopenií, protože pozitivní pacienti vykazovali nižší hladiny buněk než negativní pacienti ()., Závěrem lze říci, že anti-SSA / Ro60 a anti-Ro52 / TRIM21 vykazovaly v SLE společné i specifické asociace. Tyto údaje tak zvyšují důkazy o různých sdruženích obou Anti-ro specifik i při určité nemoci.
1. Úvod
Anti-SSA/Ro60 a anti-Ro52/TRIM21 patří mezi nejčastěji zjištěny autoprotilátky v rutinní screening pro systémové autoimunitní onemocnění., I když obě protilátky reactivities byly považovány za součást anti-Ro systému po dlouhou dobu, nyní je jasně stanoveno, že jejich antigeny jsou různé, nejsou součástí stabilní makromolekulární komplex, a jsou umístěny v různých buněčných kompartmentů (přezkoumána v ). Navíc protilátky proti SSA / Ro60 a anti-Ro52 / TRIM21 byly také spojeny s odlišným vzorem klinických projevů., Přítomnost anti-SSA / Ro60 tedy souvisí s autoimunitními procesy, zejména systémovým lupus erythematosus (SLE) a Sjögrenovým syndromem (SS), zatímco Anti-Ro52/TRIM21 vykazuje širší spektrum asociací onemocnění . Hlavní klinické autoimunitní subjektům spojeným s anti-Ro52/TRIM21 jsou SS, systémové sklerózy (SSc), jater, autoimunitní onemocnění, a, speciálně, myozitida, kde to bylo považováno za nezávislý marker . Také anti-Ro52 / TRIM21 byl detekován v neautoimunních stavech, jako jsou infekce a neoplastická onemocnění ., Kromě toho byly také hlášeny různé asociace se specifickými klinickými projevy, zejména u Anti-Ro52 / TRIM21. Tato Anti-Ro reaktivita je skutečně silně spojena s vrozeným srdečním blokem u novorozeneckého lupusu as intersticiálním onemocněním plic . Anti-Ro52 / TRIM21 také souvisel s závažnějším onemocněním u SS, myositidy, primární biliární cirhózy a autoimunitní hepatitidy .
u systémových autoimunitních onemocnění vykazuje SLE specifický vzor Anti-Ro protilátek., Ačkoli současná reaktivita je častější vzor protilátek, toto onemocnění vykazuje nejvyšší prevalenci izolovaných Anti-SSA/Ro60 . V SLE byly protilátky proti systému Ro historicky spojeny s fotosenzitivitou, ale existuje jen málo informací o spojení obou Anti-Ro reaktivit s jinými klinickými projevy ., Proto s touto myšlenkou v pozadí, cílem této práce bylo analyzovat, jestli anti-SSA/Ro60 a anti-Ro52/TRIM21 protilátky jsou rozdílně spojené s klinickou klasifikaci kritéria a další časté projevy SLE.
2. Pacienti a metody
2.1. Pacienti, Sera Výběr, a Analyzovány Vlastnosti
Séra 141 SLE pacientů (131 žen, průměrný věk při diagnóze 36.7 ± 14,5 let), kteří splnili American College of Rheumatology (ACR) kritéria byly vybrány pro tuto studii ., Tito pacienti byli sledováni na Interní Lékařství Autoimunitní Onemocnění Jednotky, Hospital Universitario Central de Asturias, a jejich klinické a imunologické vlastnosti byly zaznamenány v databázi SLE pacientů stanovena v našem regionu od roku 2004, který je pravidelně aktualizován . Funkce zaznamenané v této databázi zahrnovaly klasifikační kritéria ACR a další související projevy SLE nebo imunologické parametry. V této práci byly kumulativně registrovány všechny funkce kromě cytopenie., Cytopenie byla zvažována při diagnóze, aby se zabránilo vlivu léčby na hematologické parametry. Statisticky byly analyzovány pouze ty rysy, jejichž prevalence byla vyšší než 10%. Zejména rysy zahrnuté v analýze byly klasifikační kritéria ACR, nekarrující alopecie, xeroftalmie/xerostomie, Raynaudův jev a hypokomplementémie. Všechna klasifikační kritéria byla definována tak, jak je uvedeno v kritériích ACR z roku 1996 s výjimkou neurologických poruch., V tomto projevu SLE byl vedle záchvatů a psychózy zvažován také syndrom organického mozku, poruchy zraku a onemocnění periferních a kraniálních nervů. Hypocomplementemia byla definována jako nízká C3 a/nebo C4 úrovně (<0.8 mg/dL a <0,15 mg/dL, resp.).
Sera odpovídající různým pacienta revize byly shromážděny a uloženy při teplotě -20°C. poslední séra od každého pacienta byla vybrána pro studium (období sběru od února 2007 do Března 2011). Průměrný věk v době analýzy byl roky.
2.2., Stanovení Autoprotilátek, Doplňují a Hematologické Parametry
Stanovení anti-SSA/Ro60 a anti-Ro52/TRIM21 protilátek v 141 vybrané SLE pacientů byla provedena fluor enzymoimunoanalýzou (Thermo Fisher Scientific-Phadia GmbH, Freiburg, Německo). Test byl proveden na automatizovaném analyzátoru ImmunoCAP 250. U všech pacientů, ostatní SLE ANA specifika (anti-dsDNA, SS-B/La, U1RNP, a Sm) a antikardiolipinové (CL) IgG a IgM protilátky byly také současně určuje se stejnou metodiku., Hladiny C3 a C4 byly měřeny nefelometrií (Beckman Coulter Inc., Kalifornie, USA).
Úrovně hematologické parametry, kvantifikované pomocí Advia 2120 analyzer (Siemens Healthcare, Erlangen, Německo), byly k dispozici v době stanovení autoprotilátek u 128 pacientů (119 žen; průměrný věk při stanovení diagnózy a na analýzu a let, resp.). Leukopenie, lymfopenie a trombocytopenie byly posouzeny podle ACR kritérií (<4.00 × 103/µL, <1.50 × 103/µL, a <100.00 × 103/µL, resp.,) a anémie byla definována koncentrace hemoglobinu <11.0 mg/dL u žen a <12.0 mg/dL u mužů.
2.3. Statistická Analýza
sdružení přítomnost anti-SSA/Ro60 a anti-Ro52/TRIM21 s projevy SLE byla analyzována pomocí binární logistické regrese upravený pro pohlaví a věk v době stanovení diagnózy a v době analýzy., Dříve byla přítomnost anti-Ro specifik i anti-dsDNA, SSB/La, RNP, SM a CL protilátek současně analyzována postupnou logistickou regresí vpřed, aby se ukázal jeho vliv na každý klinický projev a imunologický parametr. V případě potřeby byly do binární logistické regresní analýzy asociací Anti-SSA/Ro60 a anti-Ro52/TRIM21 zahrnuty další autoprotilátky, které byly statisticky vlivné. V této analýze byly obě Anti-Ro reaktivity nejprve zahrnuty dohromady jako nezávislé proměnné., Aby se zabránilo multikolinearita účinky způsobené blízký vztah existující mezi oběma specifika, protilátka samostatná analýza byla provedena, když ne statisticky významná asociace byla nalezena. Byly vypočítány kurzy (OR) a jejich 95% interval spolehlivosti (CI). Úrovně komplementu a hematologických parametrů byly porovnány studentskými nebo Mann-Whitneyovými testy podle distribuce dat. Výsledky byly považovány za statisticky významné, když hodnota byla <0.05. Statistická analýza byla provedena pomocí SPSS 15.,0 statistický softwarový balík (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
3. Výsledky
3.1. Prevalence Anti-SSA/Ro60 a Anti-Ro52/TRIM21 u SLE Pacientů
přítomnost anti-SSA/Ro60 a/nebo anti-Ro52/TRIM21 protilátek byla zjištěna v 62 ven z 141 SLE pacientů analyzovali (44.0%). Simultánní reaktivita byla hlavní pozorované protilátek vzor, 37 pacientů je pozitivní pro obě protilátky (26.2%). Anti-SSA/Ro60 sám byl přítomen ve 23 (16.3%), vzhledem k tomu, že izolované anti-Ro52/TRIM21 reaktivita byl nalezen pouze u dvou pacientů (1.4%)., Vzor protilátek v této sérii pacientů byl tedy v souladu se zavedeným vztahem mezi anti-SSA / Ro60 a SLE a nebyl spojen ani s věkem při diagnóze, ani s prevalencí pohlaví (Tabulka 1).
3.2. Sdružení Anti-SSA/Ro60 a Anti-Ro52/TRIM21 s Klinické Projevy SLE
Když anti-SSA/Ro60 a anti-Ro52/TRIM21 byly současně zařazeny jako nezávislé proměnné v regresní analýze, jediná významná souvislost našel, byl cytopenie s anti-Ro52/TRIM21 (Tabulka 2)., Vzhledem k tomuto zjištění, jsme dále analyzovali vztah mezi těmito autoprotilátky a různých typů hematologických ACR kritéria, a trend směrem k přidružení mezi anti-Ro52/TRIM21 a leukopenie/lymfopenie bylo pozorováno (Tabulka 2). Trombocytopenie nemohly být analyzovány, protože všechny trombocytopenických pacientů s anti-Ro protilátky byly pozitivní pro obě zvláštnosti (4 z 4) ani hemolytická anémie analyzovány vzhledem k nízkému počtu pacientů (pouze pět) s touto krevní poruchy.,
podobně jako u cytopenie bylo zjištěno, že orální vředy a Raynaudův jev jsou také pozitivně, i když ne významně, spojené s anti-Ro52 / TRIM21 (Tabulka 2). Když anti-Ro52/TRIM21 byl samostatně analyzován, aniž včetně anti-SSA/Ro60 jako další nezávislé proměnné, pouze asociace s Raynaudův fenomén statisticky významné (NEBO 2.46, CI 95% 1.11–5.43, ).
Nikdo ze zbývajících klinické projevy ukázala významnou souvislost s anti-SSA/Ro60 a/nebo anti-Ro52/TRIM21, zda obě protilátky byly současně nebo samostatně analyzovány.,
3.3. Sdružení Anti-SSA/Ro60 a Anti-Ro52/TRIM21 s Imunologické Parametry u SLE
Anti-SSA/Ro60 a anti-Ro52/TRIM21 také ukázal různé asociace se SLE související s imunologickými parametry. Opravdu, když se dva anti-Ro reactivities byly posuzovány společně jako nezávislé proměnné, opačný chování byl pozorován ohledně přítomnosti anti-dsDNA protilátek a hypocomplementemia, anti-SSA/Ro60 být pozitivně zapojena a anti-Ro52/TRIM21 negativně spojena (Tabulka 3)., Nicméně, pouze sdružení shledány statisticky významné byly negativní vztah mezi anti-Ro52/TRIM21 a anti-dsDNA protilátky a pozitivní mezi anti-SSA/Ro60, a hypocomplementemia. Bylo zjištěno, že nízké hladiny C3 I C4 jsou pozitivně spojeny s anti-SSA/Ro60, ale pouze souvislost s C4 byla statisticky významná. Navíc, úrovně této doplňují zlomek, ale ne ty, C3, byly také výrazně nižší v anti-SSA/Ro60 pozitivních pacientů než v negativních pacientů v době stanovení autoprotilátek (0.16 ± 0.,06 mg / dL versus mg / dL, a mg/dL versus mg / dL, pro, resp., C4 a C3).na druhé straně bylo zjištěno, že antifosfolipidové protilátky jsou negativně spojeny s anti-SSA / Ro60 (Tabulka 3). I když oba anti-Ro pozitivní skupin vykazovaly podobný pokles v procentu pacientů s antifosfolipidových protilátek, NEBO získané v anti-Ro52/TRIM21 skupina byla téměř 1 (0.97), vzhledem k tomu, že odpovídající skupiny anti-SSA/Ro60 pozitivních pacientů byl 0.33., Toto zjištění pravděpodobně odráželo silnější zapojení koexistující reaktivity anti-SSA / Ro60 do negativního vztahu s antifosfolipidovými protilátkami. Ve skutečnosti, negativní statisticky významná asociace byl nalezen pouze pro anti-SSA/Ro60 v samostatné analýzy obou specifika (NEBO 0,32, CI 95% 0.13–0.79, a NEBO 0.42, CI 95% 0.15–1.20, pro anti-SSA/Ro60 a anti-Ro52/TRIM21 resp.). Mezi analyzovaných antifosfolipidových protilátek, anti-CL IgG/IgM a lupus antikoagulans (LA) jsou ty, které našel, aby být nejvíce podílejí na tento negativní vztah (Tabulka 3)., Důsledně se, že pozorované při analýze celé antifosfolipidový skupiny, pouze anti-SSA/Ro60 bylo zjištěno, že statisticky významně spojena s anti-CL IgG/IgM, když dva anti-Ro protilátky byly samostatně analyzovány (NEBO 0,29, CI 95% 0.09–0.92, a NEBO 0,28, CI 95% 0.06–1.27, pro anti-SSA/Ro60 a anti-Ro52/TRIM21 resp.). Asociace s LA nebyl statisticky analyzovány vzhledem k velmi nízkému počtu pozitivních pacientů s anti-SS-Ro60 (2 pacienti) nebo Ro52/TRIM21 protilátky (1 pacient).,
Anti-Sm byla jediná analyzovány imunologických parametrů našli neměla být spojena buď s anti-SSA/Ro60 nebo anti-Ro52/TRIM21 (Tabulka 3).
3.4. Diferenciální Asociace Anti-SSA/Ro60 a Anti-Ro52/TRIM21 s Hematologickými Parametry
Za účelem potvrzení dříve pozorované asociace mezi anti-Ro52/TRIM21 a cytopenie, my porovnání úrovně hematologických parametrů v čase analýzy v 128 SLE pacientů na základě jejich anti-Ro52/TRIM21 stav (Tabulka 4). Z těchto pacientů bylo 110 (86, 6%) léčeno antimalariky, 48 (37.,8%) s kortikosteroidy, a 30 (23.6%) s imunosupresivní léky (azathioprin, metotrexát nebo mykofenolát mofetil). Nikdo nebyl léčen biologickou terapií. Bylo zjištěno, že průměrné hladiny leukocytů jsou významně nižší u skupiny pacientů s protilátkami proti Ro52/TRIM21 (). Tento účinek byl vyvíjen hlavně na lymfocyty, protože pozitivní pacienti proti Ro52/TRIM21 vykazovali výrazně nižší hladiny lymfocytů než negativní pacienti ()., Navíc, vztah mezi anti-Ro52/TRIM21 a lymfopenie byla dále potvrzena pomocí logistické regrese upravený pro pohlaví, věku a léčby v době analýzy (NEBO 2.72, 95% CI 1.08–6.88, ).
naproti tomu při zvažování anti-SSA/Ro60 vykazovaly hladiny hematologických parametrů jiné chování (Tabulka 5). Ve skutečnosti nebyly zjištěny žádné statisticky významné rozdíly v populaci leukocytů, zatímco u pacientů pozitivních na anti-SSA/Ro60 byly hladiny hemoglobinu významně nižší než u negativních pacientů ()., I přes tento významný rozdíl byla průměrná hladina hemoglobinu u pozitivních pacientů v normálním rozmezí. Na druhé straně byly hladiny krevních destiček u Anti-SSA/Ro60 pozitivních pacientů téměř významně vyšší než u negativních pacientů (). Toto zjištění by mohlo být ovlivněno negativní asociací, kterou jsme našli mezi touto Anti-ro specificitou a anti-Cl IgG/IgM protilátkami, o nichž je zase známo, že snižují hladinu krevních destiček. Ve skutečnosti, u pacientů pozitivních na anti-CL IgG/IgM ukázal trend, že mají nižší hladiny krevních destiček než negativních pacientů (209.8 ± 69.3 × 103/µL versus 241.1 ± 69.,6 × 103 / µL,, resp.).
4. Diskuse
V této práci, anti-SSA/Ro60 a anti-Ro52/TRIM21 bylo prokázáno, že vykazují odlišný vzor klinické a imunologické sdružení v SLE. Podle dříve popsaného vztahu mezi anti-SSA / Ro60 a SLE bylo zjištěno , že tato Anti-Ro specificita je pozitivně spojena s hypokomplementemií, imunologickým znakem souvisejícím SLE., Na druhou stranu, negativní asociace byla pozorována mezi anti-Ro52/TRIM21 a anti-dsDNA, která je v souladu s vyšší prevalence této protilátky v jiných autoimunitních onemocnění, jako jsou SS, myozitida, SSc, a onemocnění jater .
obě Anti-Ro reaktivity také vykazovaly odlišné chování v souvislosti s hematologickými abnormalitami. Tak, anti-Ro52/TRIM21 bylo zjištěno, že významně spojené s lymfopenie, nezávisle na léčebný režim, vzhledem k tomu, že u pacientů s anti-SSA/Ro60 protilátky vykazovaly vyšší destiček čísla a nižší hladiny hemoglobinu než negativních pacientů., Lymfopenie dříve souvisela s přítomností protilátek proti Ro v SLE a SS . Naše zjištění podporují specifický vztah anti-Ro52 / TRIM21 s lymfopenií v SLE popsanou v předchozích pracích . U různých podskupin lymfocytů, existují důkazy, že CD4+ a NK buněk jsou zapojeny v lymfopenie spojené s anti-Ro nebo, přesněji, s anti-Ro52/TRIM21 ., Na Ro52/TRIM21 antigen je cytoplazmatický protein, který může být vyvolán a šířen do jádra nebo povrchu buňky několika stresu a prozánětlivých stimulů, jako je typ i a II, Ifn, v různých typech buněk včetně lymfocytů . Zajímavé je, že exprese Ro52/TRIM21 byla upregulována v mononukleárních buňkách periferní krve pacientů SLE a SS ., Je lákavé spekulovat, že prozánětlivých prostředí charakteristické pro systémové autoimunitní onemocnění, může vyvolat expresi Ro52/TRIM21 na povrchu lymfocytů, což umožňuje navázání specifické protilátky, které by nakonec způsobit buněčnou smrt. V tomto ohledu bylo popsáno, že autologní séra obsahující Anti-Ro zvyšují buněčnou smrt apoptózou v kulturách SLE lymfocytů . bylo zjištěno, že protilátky proti Ro
byly dříve spojeny s nižší prevalencí trombocytopenie u pacientů s SLE ., Možná role reaktivity anti-SSA / Ro60 v této negativní asociaci je podporována trendem směrem k vyšším hladinám krevních destiček u pozitivních pacientů proti SSA / Ro60 než u negativních pacientů pozorovaných u nás. Nicméně naše údaje naznačují, že tento ochranný účinek by byl nepřímý a nepřímo závislý na stavu antifosfolipidových protilátek. Ve skutečnosti, jsme zjistili, že anti-SSA/Ro60 byla negativně spojena s antifosfolipidovým a anti-CL IgG/IgM protilátky, které, podle pořadí, byly v souvislosti s nízké hladiny krevních destiček ., Naše data také podporují vyšší zapojení specifičnosti anti-SSA / Ro60 do dříve zdůrazněné negativní asociace anti-Ro s anti-Cl protilátkami . Nakonec pozorovaný negativní účinek přípravku anti-SSA / Ro60 na hladinu hemoglobinu nestačí k tomu, aby byl považován za anémii. Všechna tato zjištění tedy naznačují, že anti-SSA / Ro60 nemá žádný patologický účinek na žádnou hematologickou populaci na rozdíl od anti-Ro52/TRIM21.,
podobně jako u lymfopenie bylo zjištěno, že anti-Ro52/TRIM21, ale ne anti-SSA / Ro60, je pozitivně spojen s Raynaudovým jevem. Tento vztah byl nezávislý na přítomnosti anti-u1rnp, protilátky, o které je známo, že souvisí s Raynaudovým jevem i v SLE . Bylo také zjištěno, že protilátky proti systému Ro jsou spojeny s Raynaudovým jevem v SS ., Podporou konkrétních roli anti-Ro52/TRIM21 v tomto sdružení, to je zajímavé poznamenat, že tato protilátka byla detekována přibližně u 20% pacientů s SSc, kde Raynaudův fenomén je základní funkce . Kromě toho bylo také hlášeno, že anti-Ro52 / TRIM21 je druhým nejčastějším autoprotilotem v jedné kohortě SSc .
Fotosenzitivita a xeroftalmie/xerostomie byly pouze funkce nalezené být pozitivně spojena s oběma anti-SSA/Ro60 a anti-Ro52/TRIM21., Tato sdružení byla statisticky významná pouze tehdy, když byly obě autoprotilátky odděleně analyzovány pravděpodobně kvůli úzkému vztahu mezi nimi. Ačkoli protilátky proti systému Ro byly historicky považovány za spojené s fotosenzitivitou, tento vztah zůstává kontroverzní . Kromě toho je málo známo o spojení se dvěma různými reaktivitami ., Nicméně, lepší výraz SSA/Ro60 a Ro52/TRIM21 byla pozorována v cytoplazmě, nebo na povrchu buněk keratinocytů po UV ozáření a tím podporují vztah mezi fotosenzitivní a reaktivita proti oběma antigenům .
na druhé straně je u pacientů s SLE jasně stanovena souvislost mezi xeroftalmií / xerostomií a anti-Ro . Podobně jako u našich zjištění byla také hlášena souvislost s anti-SSA/Ro60 nebo anti-Ro52/TRIM21 ., Tyto dva Ro antigenů byly hlášeny být vyjádřeny na povrchu buněk lidského ductal epiteliálních buněk během apoptózy což naznačuje roli této buněčné smrti mechanismus indukce anti-SSA/Ro60 a anti-Ro52/TRIM21 odpovědi . Kromě toho, specifické anti-SSA/Ro60 a anti-Ro52/TRIM21 B buněk s rozlišováním vzor kompatibilní s plazmatické buňky byly detekovány v slinných žláz SS pacientů .
5. Závěry
Anti-SSA / Ro60 a anti-Ro52 / TRIM21 vykazovaly v SLE odlišný vzorec klinických a imunologických asociací., Vedle společných pozitivních asociací s fotosenzitivitou a xerophthalmií/xerostomií vykazovaly obě Anti-Ro reaktivity pozitivní i negativní specifické asociace. Anti-SSA/Ro60 bylo zjištěno, že být pozitivně spojena s hypocomplementemia ale negativně s antifosfolipidových protilátek, vzhledem k tomu, anti-Ro52/TRIM21 ukázal pozitivní asociace s lymfopenie a Raynaudův fenomén a negativní vztah s anti-dsDNA protilátek., Naše údaje tedy zvyšují důkazy o různých sdruženích obou Anti-ro specifik se specifickými klinickými projevy i při jediné nemoci.
střet zájmů
autoři nehlásí žádný střet zájmů.
studie neobdržela žádnou finanční podporu od žádné organizace., Autoři díky Thermo Fisher Scientific-Phadia GmbH pro velkoryse poskytuje autoprotilátek soupravy pro tuto studii, Ana Ynés Martínez Paredes pro její technické pomoci, a Pablo Martínez Camblor z Biomedicínské Vyšetřování Úřadu (OIB-FICYT) asturského Knížectví pro statistickou analýzu. Jsou také obzvláště vděční Dr. Carmen Gutiérrezové a Asociación Lúpicos de Asturias za jejich povzbuzení a podporu. Iván Cabezas-Rodríguez je podporován programem Río Hortega, Instituto de Salud Carlos III, Španělsko.